פרויקט ביוטק

1. פרויקט ביוטק מבצעי הפרויקט: נתנאל מאיר וזוהר מנבר המנחים:ד"ר מרטין גולדויי, צביה פיזם, דורית מגלי, איילת בן ציון מפעל מנחה: "אתרוג"

2. נושא המחקר: הרכב המצע בצלחות הסלקציה למיון המושבות הדרושות במחקר החדרנו גן לתוך פלסמיד. את הגן החדרנו לפלסמיד באזור שמקודד לβ גלקטוזידז.לכן בחיידקים שקלטו פלסמיד משובט (שחדר אליו הגן) לא יווצר β גלקטוזידז . הβ גלקטוזידז הוא אנזים המפרק לקטוז לגלוקוז וגלקטוז, בניסוי הוספנו למצע חומר שהוא אנלוג ללקטוז –X-GAL ובעת פירוקו נוצר צבע כחול.על ידי חומר זה נוכל להבדיל בין החיידקים שקלטו פלסמיד לא משובט ויכולים לייצר β גלקטוזידז לאלה שקלטו פלסמיד משובט.

3. בנוסף הוספנו גם חומר שנקרא IPTG . הIPTG מאפשר את יצירת ה β גלקטוזידז על ידי החיידק מפני שהוא מחליף את המשרן באופרון הלקטוז, ומאפשר את סינטזת ה mRNA של β גלקטוזיזדז. זרענו את החיידקים על צלחות הסלקציה עם הרכב מצעים שונה: קבוצה 1 מכילה–LB . קבוצה 2 מכילה – אמפיצילין +LB+IPTG . קבוצה 3 מכילה אמפיצילין+LB+IPTG+X-GAL. המתנו לגדילת המושבות בטמפרטורה של 370C למשך 18 שעות.

4. שאלת המחקר:כיצד הרכב המצע מסייע במיון המושבות הדרושות? השערה:רק בצלחות המכילות LB, אמפיצילין, IPTG ו X-GAL ניתן יהיה להבחין בין המושבות המשובטות ללא משובטות. משתנה תלוי:מספר המושבות הלבנות והכחולות שגדלו על גבי כל צלחת, אופן מדידתן הוא ספירה ידנית. משתנים בלתי תלויים-החומרים שהוספו לצלחות: אמפיצילין, X-GAL ו- IPTG

5. תיאור ויזואלי של סביבת הניסוי אינקובטור צלחות סלקציה

6. תוצאות ממוצע מספר מושבות כתלות בהרכב המצע

7. על פי הטבלה ניתן לראות שבצלחות ללא אמפיצילין היה מרבד מושבות לבנות, ובאחת הצלחות שהכילו LB+אמפיצילין- IPTG+X-GAL היו מושבות בודדות בצבע לבן וכחול בשאר הצלחות לא היו כלל מושבות. .

8. על פי הטבלה ניתן לראות שבצלחות ללא אמפיצילין היה מרבד מושבות לבנות, ובאחת הצלחות שהכילו LB+אמפיצילין- IPTG+X-GAL היו מושבות בודדות, בשאר הצלחות לא היו כלל מושבות. ניתן לשער שהתוצאות המשובשות נגרמו כתוצאה מכך שלא חלה כמעט טרנספורמציה. הסבה לכך כנראה היתה שהחיידקים הקומפנטנטים לא נשמרו בטמפרטורה מתאימה. ובמעבר לביה"ס עברו שינויי טמפרטורה רבים. בצלחת שהכילה LB+ אמפיצילין- IPTG+X-GAL ניתן לראות שגדלו מושבות לבנות סמוך לכחולות, מושבות אלה גדלו כ – 24 שעות לאחר הופעת המושבות הכחולות, מכך ניתן להסיק שהמושבות הכחולות פירקו את האמפיצילין בסביבתם ולכן יכלו לגדול מושבות של חיידקים אשר אינם עמידים לאמפיצילין. דיון ומסקנות

9. על פי הספרות:במצעים המכילים LB בלבד-LB הוא מצע אשר מתאים לתנאים שלהם זקוקים החיידקים, ניתן לשער שבצלחות ללא אמפיצילין יגדלו מרבדי מושבות לבנות ללא פלסמיד כלל.במצעים המכיליםLB +אמפיצילין+IPTG-נצפה לראות מושבות לבנות שעל פי המצופה כולן בעלות פלסמיד אך לא ידוע אם הוא משובט או לא.במצעים המכילים LB +אמפיצילין+IPTG+X-GAL -נצפה לראות מושבות כחולות ומושבות לבנות. הלבנות הן המשובטות והכחולות לאהצעות לשיפור:על מנת שניסוי זה יצליח בעתיד אנו ממליצים להקפיד לשמור את החיידקים הקומפנטנטים בטמפ' מתאימה להם. בנוסף אנו ממליצים לעשות מספר חזרות גדול יותר כדי שהתוצאות יהיו מדויקות ואמינות יותר.

10. מקורות http://www.hs.ph.biu.ac.il/prokaryotes/background.shtml http://www.amalnet.k12.il/sites/genetic/default.asp