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三聚氰胺免疫层析试纸的研制和应用

三聚氰胺免疫层析试纸的研制和应用. 姓名：王晓伟 专业：生物工程. 目 录. 一.引言. 二 . 目的与原理. 三 . 方法过程. 四 . 结论. 五.致谢. Company Logo. 一、引 言.

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三聚氰胺免疫层析试纸的研制和应用

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Presentation Transcript

  1. 三聚氰胺免疫层析试纸的研制和应用 姓名：王晓伟 专业：生物工程

  2. 目录 一.引言 二.目的与原理 三. 方法过程 四.结论 五.致谢 CompanyLogo

  3. 一、引 言 三聚氰胺的检测方法有很多，传统的方法主要是仪器分析法，有高效液相色谱法（HPLC）、气-质联用色谱法 (GC-MS)、液-质联用色谱法（LC-UV）和酶联免疫吸附法，但这些方法需要特殊的仪器设备和一定数量的操作人员，且样品前处理比较繁琐、耗时、费力，效果不明显，当在我们遇见一些突发事件，需要现场快速检测样品，仪器分析法显然不能满足要求，因此加强食品、药品安全监督，发展快速检测方法是十分重要的。 Company Logo

  4. 二、研究目的及原理 目的：研制一种特异性强、灵敏度高，且操 作简单方便，对样品经过简单处理即 可进行检测的快速试纸检测方法 原理：胶体金以硝酸纤维素膜为载体，利用 了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜 条一端的液体慢慢向另一端渗移，通 过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现 颜色（红色）反应，检测抗原/ 抗体。 Company Logo

  5. 原理图—阳性（竞争法） 液体流向 （含三聚氰胺） T-line C-line Company Logo

  6. 原理图—阴性（竞争法） 液体流向（不含三聚氰胺） T-line C-line Company Logo

  7. 三、实验过程 *胶体金的制备 *胶体金的质量鉴定 *金标单抗的制备 *金标单抗液的质量鉴定 *金标垫的制作 *试纸条的组装 *试纸条的试验 Company Logo

  8. 1.胶体金的制备 柠檬酸三钠分子结构式和表面带负电的金 胶体金结构图 胶体金是用过量的柠檬酸钠还原氯金酸制得，微碱性环境下，胶体金纳米粒子表层带有负电荷；外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，可以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。

  9. 2.胶体金质量鉴定 第一瓶：加入还原剂1%柠檬酸钠2.5ml时所制得的胶体金； 第二瓶：加入还原剂1%柠檬酸钠2.0ml时所制得的胶体金； 第三瓶：加入还原剂1%柠檬酸钠1.5ml时所制得的胶体金； 第四瓶：加入还原剂1%柠檬酸钠1.0ml时所制得的胶体金。 还原剂均为100lm 0.01%氯金酸 4 3 2 1 柠檬酸钠量不同，粒径不同，胶体金颜色变化 CompanyLogo

  10. 不同粒径胶体金紫外吸收 不同粒径胶体金紫外吸收对比图 ——为加入1.0ml的柠檬酸钠所制得胶体金，吸收峰在532nm处； ——为加入1.5ml的柠檬酸钠所制得胶体金，吸收峰在526nm处； ——为加入2.0ml的柠檬酸钠所制得胶体金，吸收峰在524.5nm处； ——为加入2.5ml的柠檬酸钠所制得胶体金，吸收峰在519nm处。 柠檬酸钠量不同，金粒径不同，胶体金紫外吸收变化 CompanyLogo

  11. 不同粒径胶体金粒径分布 不同粒径胶体金粒度分布对比图 ——为加入1.0ml的柠檬酸钠所制得胶体金，peak=52nm； ——为加入1.5ml的柠檬酸钠所制得胶体金，peak=34.8nm； ——为加入2.0ml的柠檬酸钠所制得胶体金，peak=38.5nm； ——为加入2.5ml的柠檬酸钠所制得胶体金，peak=25nm。 柠檬酸钠量不同，金粒径变化

  12. 实验胶体金的选择 胶体金的粒径在20-40nm时可应用于试纸的检测，经过上述的质量鉴定分析，结果显示加入2.5ml柠檬酸钠所制得的胶体金的粒径在20-40nm的范围内，且质量可靠，体系均匀稳定，保存时间长，是首选材料，在后续的实验中所使用的胶体金均为加入2.5ml柠檬酸钠所制得。 Company Logo

  13. 实验胶体金目测 胶体金溶液均匀、透亮、酒红色

  14. 实验胶体金紫外吸收 胶体金的紫外吸收峰在519nm处。 Company Logo

  15. 实验胶体金粒径分布 图2 图1 图1显示：胶体金颗粒的平均粒径在23nm左右，粒度强度分布在27nm左右；图2显示：胶体金的粒径95%左右分布在20-50nm的范围内。数据显示质量报告良好，说明所制得的胶体金均一、稳定、混乱度低、不易发生沉淀，大部分粒径分布在27nm处。 Company Logo

  16. 实验胶体金原子力显微镜扫描图 原子力显微镜下观察胶体金颗粒的大小均匀分散、几乎无椭圆形及多角形、没有明显的颗粒聚集情况。（d=27nm） Company Logo

  17. 3.金标单抗的制备 • 调胶金液的pH； • 胶金液中加入三聚氰胺单抗，室温培养； • 离心； • 胶金沉淀溶于PB液。 Company Logo

  18. 4.金标单抗的质量鉴定 ——为胶体金的紫外吸收； ——为金标单抗液的紫外吸收。 图中可见金标单抗液的紫外吸收明显比胶体金的紫外吸收波长长，说 明胶体金标记单抗后其粒径明显的增大，产生明显的红移现象。 Company Logo

  19. 金标单抗粒径分布 金与金标单抗粒径分布 金标单抗粒径分布 左图中： 金标单抗颗粒的平均粒径在112nm、强度粒度分布在149nm左右。所制得的金标单抗液的质量良好，均一、稳定，大部分粒径分布在149nm左右处。 右图中： ——为胶体金的粒度分布； ——为胶体金标记三聚氰胺单抗后的粒度分布。 图中可见胶体金标记三聚氰胺单抗后的粒径与金颗粒的粒径相比明显变大，说明金颗粒与三聚氰胺单抗成功结合。 Company Logo

  20. 5.金标垫的制作（浸金） ① 将玻璃纤维素膜浸润在金标单抗中，直至胶金液完全浸润玻璃纤维素膜； ② 将玻璃纤维素膜从胶金液中取出，放入电热鼓风干燥箱中。 CompanyLogo

  21. 6.试纸条的组装 液体流向 Company Logo

  22. 试纸条的组装 1-吸水纸；2-胶金垫；3-检测线（T线）；4-质控线（C线）；5-硝酸纤维素膜；6-吸水纸；7-支撑板。

  23. 7.试纸条的试验 试纸卡结果判定依据 Company Logo

  24. 试纸卡测试图 测试结果良好，符合预期设计 Company Logo

  25. 特异性检测 试纸条作用于三聚氰氯、三聚氰酸这两种物质时效果远低于作用于三聚氰胺的效果。 1ppm 2.5ppm Company Logo

  26. 灵敏度检测 测试结果 与中国市 场牛奶和 婴幼儿配 方乳粉中 三聚氰胺 限量一致。 Company Logo

  27. 稳定性检测 将组装好的三聚氰胺试纸条密封，放在冰箱储存一个月，拿出试验，其效果和新组装的试纸条相比几乎没有任何区别，说明其稳定性较好。 Company Logo

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