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Microbiología Aplicada Trabajo Práctico N°1. Estudios de la actividad antimicrobiana . Antecedentes históricos. Descubrimiento de los antibióticos…. Alexander Fleming (1928): Observó que el hongo Penicillium notatum impedía el crecimiento de Staphylococcus aureus
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MicrobiologíaAplicadaTrabajo Práctico N°1 Estudios de la actividad antimicrobiana
Antecedentes históricos.Descubrimiento de los antibióticos… Alexander Fleming (1928): Observó que el hongo Penicillium notatum impedía el crecimiento de Staphylococcus aureus Florey y Chain (1939): aislaronPenicilina G Penicillium notatum
Antecedentes históricos.Descubrimiento de los antibióticos… Foto original tomada por Fleming Foto actual El hongo Penicillium notatum impide el crecimiento de Staphylococcus aureus
Antibióticos… Antimicrobiano: Sustancia capaz de actuar sobre los microorganismos, inhibiendo su crecimiento o destruyéndolos. Antibiótico: • Sustancia producida por el metabolismo de organismos vivos,principalmente hongos microscópicos y bacterias, que posee la propiedad de inhibir el crecimiento o destruir microorganismos. • Según su origen, los antibióticos pueden ser: • Biológicos (naturales):sintetizados por organismos vivos, ej. Penicilina, Cloranfenicol. • Semisintéticos:obtenidos por modificación química de antibióticos naturales, ej. Ampicilina. • Sintéticos:generados mediante síntesis química, ej. Sulfas.
Evaluación de la susceptibilidad a un antibiótico… En el laboratorio se puede estudiar la susceptibilidad a antimicrobianos que presentan bacterias aisladas desde una muestra biológica... La susceptibilidad a antimicrobianos, junto con la identidad de la bacteria aislada y ciertos factores del hospedero constituyen las bases para la elección de una terapia antimicrobiana adecuada…
Concentración inhibitoria mínima (CIM) Corresponde a la menor concentración de antimicrobiano que inhibe el crecimiento bacteriano luego de 18 a 24 horas de incubación. Concentración bactericida mínima (CBM ) Corresponde a la menor concentración capaz de matar un 99,9% la población bacteriana. Definiciones…
Antibiograma pordilución… • Técnica de referencia en la mayoría de los estudios clínicos de susceptibilidad a antimicrobianos. • Entrega un resultadocuantitativo, ya que permite determinar la concentración inhibitoria mínima(CIM). • Se puede realizar en medio líquido(dilución en caldo)o en medio sólido(dilución en agar). • Método complejo y de alto costo. Lectura del CIM CIM Dilución seriada en caldo
Antibiograma pordifusión… “(Técnica de Kirby-Bauer)” • Es el método más usado… • Es práctico y sencillo de realizar e implementar… • Permite analizar un gran número de antibióticos al mismo tiempo y bajo las mismas condiciones… • Entrega un resultadocualitativo…(bacteria sensible o resistente) Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am J Clin Pathol. 1966 Apr;45(4):493–496.
Antibiograma pordifusión… “(Técnica de Kirby-Bauer)” Análisis de varios antibióticos en un mismo ensayo Resistente (No hay halo de inhibición) Sensible (Presencia de halos de inhibición)
Factores que afectan la actividad antibacteriana“in vitro”… • pH del medio de cultivo:algunos antibióticos son activos a pH ácido (nitrofurantoína) y otros lo son a pH alcalino (aminoglucósidos). • Componentes del medio de cultivo:pueden antagonizar al antibiótico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas). • Estabilidad del medicamento:algunos antibióticos se inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en menor grado penicilina) • Tamaño del inóculo:si hay muchas bacterias, la susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes resistentes. • Tiempo de incubación:si es muy breve los m.o. no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes resistentes o inactivarse el medicamento.