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L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali

L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali. APPROCCIO PROTEOMICO. PREFRAZIONAMENTO. 1-Estrazione differenziale 2-Frazionamento subcellulare 3-Cromatografia. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 1. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 2. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 3.

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L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali

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Presentation Transcript

  1. L’approccio genomico non tiene conto di modificazioni post-traduzionali

  2. APPROCCIO PROTEOMICO

  3. PREFRAZIONAMENTO 1-Estrazione differenziale 2-Frazionamento subcellulare 3-Cromatografia

  4. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 1

  5. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 2

  6. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO 3

  7. PREFRAZIONAMENTO:ESEMPIO

  8. ANALISI PROTEOMICA: TECNOLOGIE

  9. ELETTROFORESI BIDIMENSIONALE • Efficace procedura di preparazione • del campione • Proteine denaturate e solubili (urea, • Detergenti,…) 1° dimensione: Fino a 4 mg di proteine totali per strip Il campione viene comunementepre- adsorbito sulle strip durante la loro reidratazione, permettendo anche alle HMW proteins di entrare nel gel. Questo processo dura almeno 11 ore, dopodichè si può passare alla focalizzazione Durante la corsa elettroforeticala conduttività del gel cambia dipendentemente dal numero di specie cariche, diminuendo mano a mano che le varie specie si focalizzano. 2° dimensione:La transizione dalla prima alla seconda dimensione coinvolge l’equilibrazione della striscia focalizzata in tampone contenente SDS, la deposizione di essa sul gel di corsa e l’inglobamento in un gel di agarosio. COLORAZIONE

  10. COLORAZIONE PROTEINE

  11. COLLEGAMENTO A BANCHE DATI

  12. COLLEGAMENTO A BANCHE DATI COMPARAZIONE CON 2D IN BANCA DATI

  13. ANALISI DIFFERENZIALE Detection of protein alterations in male breast cancer using 2D-gel electrophoresis and mass spectrometry.The involvement of several pathways in tmorogenesis K. Chahed et al. Clinica Chimica Acta (2007) N=normale T=tumore

  14. ANALISI DIFFERENZIALE Detection of protein alterations in male breast cancer using 2D-gel electrophoresis and mass spectrometry.The involvement of several pathways in tmorogenesis K. Chahed et al. Clinica Chimica Acta (2007)

  15. ANALISI DEL GEL

  16. IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

  17. IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

  18. IDENTIFICAZIONE DELLO SPOT

  19. TECNICHE MS E POTENZIALITA’

  20. PROTEIN MICROARRAY

  21. PROTEOMICA CON SELDI-TOF SELDI= Surface-Enanched Laser Desorption-Ionization Time-of-Flight Mass-Spectometer

  22. PROTEOMICA CON SELDI-TOF

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