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绪 论. 一、临床检验( clinical laboratory technology or science ). 又称实验诊断学,就是通过实验室的各种检查方法,包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等,对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析,以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料 。. 二、临床检验在医学中的作用. 1 、为准确诊断、及时治疗提供依据. 临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的 主要依据。. 依据:血中红细胞和血红蛋白量减少. 例: anemia. leukemia. 依据:血象和骨髓象.
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绪 论 • 一、临床检验(clinical laboratory technology or science) 又称实验诊断学,就是通过实验室的各种检查方法,包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等,对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析,以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。
二、临床检验在医学中的作用 1、为准确诊断、及时治疗提供依据 临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的 主要依据。 依据:血中红细胞和血红蛋白量减少 例:anemia leukemia 依据:血象和骨髓象 尿液中出现蛋白、细胞 管型 肾脏有实质性损伤的依据 问:tumor?
2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中,血液、体液、分泌物和排泄物也 会随之发生相应的变化 3、为预防疾病提供资料 如血象和肿瘤细胞学的普查等
三、临床检验的一般方法 1、目视检查 直接观察标本:颜色、透明度、性状,有无 凝块或寄生虫 2、理学检查 液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降 率、红细胞比积等病理变化 3、化学检查 定性和定量检测标本化学成分的病理变化 观察有型成分的数量和形态 4、显微镜检查 5、自动化仪器检查 电子技术、程序控制的发展
四、学习临床检验的目的和要求 1、理论联系实践 2、操作要求 3、检验结果必须和临床表现结合 4、检验人员的医德
第一章 一般性操作技术 血液学检查 : 反应造血系统本身、机体全身或局部病变 有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察 只能反应疾病某一方面的情况,不能认为是病程的全部反应;不同个体,对同一影响有不同的反应,或也可对不同影响产生 相同的反应
一、血液标本的采集 1、毛细血管采血法 • 部位:中指或无名指尖内侧,半岁以下拇指或 • 足部,特殊人员视情况而定。 b. 所用器材:采血针、吸管 c. 采血步骤及注意事项
2、静脉采血法 • 部位:主要是肘静脉。还可以在:手背部手腕部等 • 幼儿可采用颈外静脉采血。 • 采血器材:一次性注射器,检验用真空定量采血装 • 置 c. 采血步骤及注意事项
两种采血方法的优缺点比较 毛细血管 静脉血 限制了重复实验和追 加实验,标本量少, 局部炎症可得假结果 ,组织液可混入 不同抗凝剂的使用, 改变血液性质,影响 有形成分的形态 缺点 标本代表性大,无组 织液影响,适于临床 研究,可重复实验和 追加其他实验 价廉、快速、操作简 便,标本可直接测定 优点
二、常用血液标本抗凝剂及其使用选择 • 1、柠檬酸钠(枸橼酸钠) 化学名:3-羟基-3-羧基戊二酸(三钠盐) a. 抗凝原理:螯合钙离子 • 使用方法 配成109 mmol/L的浓度和血液1:9 • 106 mmol/L的浓度和血液1:4 c. 适用范围:止血学检验、血沉、输血保养液(毒性小)
2. 草酸钠(乙二酸的钠盐) a. 抗凝原理:草酸钙沉淀 b. 使用方法 草酸钠0.1mol/L 和血液1:9 c. 适用范围: 止血学检验
3. 双草酸盐抗凝剂 a. 抗凝原理: 草酸钙沉淀 • 使用方法: 草酸钾0.8g , 草酸铵1.2g(100ml) • 与血液 1:10 (80°C以下烘干) • 适用范围: 红细胞检验(红细胞比积、计数) • 不适于血小板计数和白细胞分类计数
4. 肝素 (含硫酸基团的粘多糖) • 抗凝原理:低浓度时抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之 • 间的作用,加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝 • 氨酸蛋白酶,从而阻止凝血酶形成, • 还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 • 因子Ⅹ的作用;高浓度时阻断凝血 • 酶和纤维蛋白的反应。 b. 适用方法: 1g/L浓度的肝素钠与血液 1:10
优点:抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 • 溶血、能耐高温。 • 适用范围: 红细胞检验(红细胞计数、血红蛋白 • 测定、红细胞比积)和多种生化分析
5. 乙二胺四乙酸(EDTA)盐 a. 抗凝原理: 螯合钙离子 b. 使用方法: 15g/L浓度EDTA 和血液 1:10 • 适用范围: 对血细胞形态影响小---血小板计数; • 影响血小板聚集和白细胞吞噬功能 • ---不易做止血学检验及血小板功能 • 检验。
物理方法抗凝: 脱纤维蛋白: 将血液注入有玻璃珠的器皿中,转动,纤维 蛋白缠绕凝固于玻璃球,从而防止血成凝块。适 用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。
三、血涂片的制备技术 • 血涂片的用途: 血细胞形态学检验、网织红、异常 • 寄生虫检验。 2. 血涂片制备步骤:(手工推片法)
将推玻片向1的方向稍抽回,当血液充满推玻片的宽度后,以一定均匀的速度向2的方向滑动。将推玻片向1的方向稍抽回,当血液充满推玻片的宽度后,以一定均匀的速度向2的方向滑动。
3. 血涂片质量评价: 均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧 注意:血滴大,速度快、角度大----血膜厚
四、 细胞染色技术 染料---生物学染色剂:将生物组织细胞和病原体染色,在显微镜 下观察结构。 (一)、染料 (天然染料和人工染料) 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染 组织亲合。
碱性染料:为阳离子染料,能接受质子,染细胞核碱性染料:为阳离子染料,能接受质子,染细胞核 • 的染料。如亚甲蓝、天青。 • 酸性染料:为阴离子染料,能释放质子。主要有荧 • 烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类,能结合 • 细胞的碱性成分并染色,如血红蛋白、 • 嗜酸性颗粒成分等。 3. 复合染料:同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料
(二)、细胞染色原理: 一般以它们的物理现象和/或化学 现象为依据 1. 物理作用:毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等 • 化学作用: • a. 染料的化学成分:助色基团的存在,碱性染料 • 在溶媒中为阳离子型,易与组织和细胞内带负电荷的 • 酸性物质结合;而酸性染料在溶媒中为阴离子型,与 • 带正电荷的碱性物质结合。
b. 蛋白质的化学性质:蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基(-NH2)和羧基(-COOH),同时还有其 他活性基团。在游离状态时, -NH2获得一个H+变成带 正电的-NH3+,而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。 分别与不同染料结合。 c. 周围环境的酸碱度:如环境pH<pI( pI 为等电 点),则蛋白质带正电,结合酸性染料;反之, pH> pI,则结合碱性染料。
(三)、细胞染色法的类型 1. 普通染色法: 经物理和/或化学作用的吸附、结合 2. 荧光染色法:荧光染料,荧光显微镜 3. 细胞活体染色法:活体染料如灿烂甲酚蓝等 4. 细胞化学染色法:用化学反应显示细胞内某种成分。 细胞免疫化学染色法(应用单克隆抗体技术、酶标记技术)
五、 瑞氏染色法 (一)、染色原理 分两相进行,第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合;碱性染料天青 B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、 血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下 形成紫色的天青B-伊红复合物,结果使白细胞核染色质成紫色(疟原虫的染色质成红色),中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。
(二)、试剂 1. Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml 甲醇:有强大的脱水力,可将细胞固定为一定 形态,并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构,增 加细胞与染料接触表面积,提高对染料的吸附作用, 增强染色效果。 • 磷酸盐缓冲液(PBS):磷酸二氢钾(无水)0.3 • g,磷酸氢二钠(无水)0.2g, 蒸馏水加到1000ml。 • 配好后用磷酸盐溶液校正pH,塞紧瓶口备用。
染色方法: • a. 用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。 • b. 加瑞氏染液覆盖血膜,固定1min。 • c. 滴加等量或稍多的缓冲液,混匀,染色5-10 • 分钟。 • d. 用清水冲洗,待干后镜检。
注意事项: • a. 血膜要干透后才能染色,否则染色时易脱落 • b. 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关, • 一般染液淡、染色时间长些效果好。 • c. 染液不能过少,以防蒸发沉淀。 • d. 冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲,防染料 • 沉着。冲洗时间也不能长。 • e. 染色过淡,可复染。 • f. 染色过深可用水冲洗或浸泡,还可用甲醇脱色
六、 姬姆萨染色法 (一)、染色原理: 基本成分仍然是伊红和亚甲蓝,改进了染料的质量,使细胞核着色好,结构显示更清晰,而胞浆和中性颗粒染色较差。 (二)、试剂 Giemsa 甲醇 纯甘油 (三)、染色方法 1. 甲醇固定干燥血膜3-5min 2. 将血膜在染液中浸染10-30min 3. 流水冲洗,待干后镜检
七、巴氏染色法 是脱落细胞染色法中较好的染色方法。