基礎放射線講座配属

基礎放射線講座配属

第１週 細胞培養の手技に慣れること • Ｍｅｄｉｕｍ交換 • 血球計算板を用いた細胞数のカウント • 継代 • 凍結保存いずれも基本的な細胞培養の手技でありピペットおよびピペットマンの正確な操作が要求される。

ピペットマンの操作実験 Ｐ２０、Ｐ200、Ｐ1000を用いてそれぞれ水を10μℓ、100μℓ、500μℓ取り、重さを電子秤で計量した。10回ずつ行い、正確な分量が取れているか確認した。同じチップを用いた場合と、毎回チップを交換した場合の両方の条件で実験を行った。

まずは使う細胞の性質を知る 第２週先週の内容に加え・細胞増殖曲線の作成（分裂増殖能）・コロニー数のカウント（コロニー形成能）を行った。

細胞増加曲線の作成 • 1.0×105の細胞を撒いたプレートを12枚用意し、翌日から１日３枚ずつプレートの細胞を回収して数え、細胞の分裂増殖能を調べた。

細胞増殖曲線 対数増殖期の１回分裂にかかる時間は　約18.4時間

コロニー数のカウント • 1000個の細胞を撒いたプレート６枚を１１日間、培養した後に形成されたコロニーをカウントした。（ここではコロニーは100個以上の細胞集団と定義した。）

１２３お手本４５６自分で撒いた分７８９ 10 11 12 細胞はなるべく均一に撒くこと！

形質導入 第３週 • 遺伝子を細胞に導入し、細胞を蛍光顕微鏡で観察し、遺伝子導入効率及び遺伝子発現の検討を行った。

蛍光顕微鏡 • ＤＮＡを①～③には１μｇ、④～⑥には2μｇ導入し、遺伝子の入らないコントロールを⑦とした。３箇所ずつ、明視野と暗視野の観察を行った。

① ④ ② ⑤ ③ ⑥ Control ⑦

蛍光抗体法 第４週 • もっとも発現の良かった前出の⑤の条件で遺伝子を細胞に導入後、蛍光抗体で標識し、蛍光顕微鏡で発現しているHA融合タンパク質細胞内局在を観察した。

以上。