知识 4 、分光光度计

知识4、分光光度计

仪器可见分光光度计

仪器紫外-可见分光光度计

（一）、基本组成 吸收池检测器光源显示色散系统 1. 光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在400～800 nm。紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。

2.色散系统 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。由单色器和准光器组成。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；出射狭缝。 ②色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅紫外用石英棱镜，可见光区用玻璃棱镜 ③准光器：透镜或凹面反光镜使入射光成为平行光束；

3. 吸光池 又称为比色皿。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 4. 检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有硒光电池、光电管或光电倍增管。 5. 结果显示记录系统电子放大线路或读数系统

第一，拿取吸收池时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，不可接触光学面。第一，拿取吸收池时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，不可接触光学面。 • 第二，不能将光学面与硬物或脏物接触，只能用擦镜纸或丝绸擦拭光学面。 • 第三，凡含有腐蚀玻璃的物质( 如 F-、SnCl2、H3PO4等)的溶液，不得长时间盛放在吸收池中。 • 第四，吸收池使用后应立即用水冲洗干净。有色物污染可以用 3 mol/L HCl 和等体积乙醇的混合液浸泡洗涤。生物样品、胶体或其他在吸收池光学面上形成薄膜的物质要用适当的溶剂洗涤。 • 第五，不得在火焰或电炉上进行加热或烘烤吸收池。

分光光度计的类型 1.单波长单光束简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 2.单波长双光束自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。

3.双波长双光束分光光度计 将不同波长的两束单色光(λ1、λ2) 快速交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用分光光度计的品种和型号繁多可见分光光度计

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用分光光度计的品种和型号繁多紫外-可见分光光度计

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计采用钨丝灯(12v、25w) 光源，玻璃棱镜单色器， 4只光学玻璃吸收池， GD-7型光电管检测器，指针式微安表指示吸光度A和透光度T，适用波长范围： 360～800nm

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ①波长调节器(λ)… …和波长读数盘调节选择单色光波长(λ)并在读数盘指示出来

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ②调节0T电位器(O) 接通电源后，打开吸收池暗箱盖，调节该旋钮使指示电表指针指向T=0(A=∞)处，以定位和校准0T点

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ③调节100%T电位器 ——(10O) 该旋钮用于调节光源的亮度，控制入射光通量(强度)；当用空白溶液测定时，调节该旋钮使指示电表指针指向 T=100(A=0)处，以定位和校准100%T点

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ④吸收池架拉杆钮该钮以拉杆与吸收池架相连，拉动拉杆可以将置于吸收池架上的吸收池依次送入光路中

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ⑤吸收池暗箱即样品室，暗箱盖通过机械装置与光电管前后的光路闸门联动，关闭暗箱盖则开启光路闸门，所以只应在调节100%T和测量操作时才关闭暗箱盖(开启光路闸门)

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ⑥吸收池又称为比色皿，侧面制成毛面，配有多种规格，通常为3、2、1、0.5cm四种规格，使用前与滴定管、移液管类似，需用盛装液冲洗干净，池外壁擦拭要使用擦镜纸，手持时应握持毛面，注液量以4/5池高为宜

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ⑦灵敏度选择钮即换档旋钮，用于选择灵敏度档次，分5 档，1档灵敏度最低，档位选择原则是：在空白溶液能调节T=100时，尽可能采用低档次；改变档次后，应重新校正0T和100%T

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ⑧电源开关外接220v交流电源，接通后，由机内的变压器和稳压器转变为12v电源给光源供电，故也称为光源开关

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 1、面板和控制钮 ⑨显示电表微安表，灵敏，标示透光度T和吸光度A 两种刻度值，通常读取吸光度A的数值

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ①开机和预热首先外观检查，正常后开启电源开关，打开暗箱盖使光路闸门关闭，预热20分钟，将盛有空白溶液和被测溶液的吸收池依次放入吸收池架中(空白溶液在前)

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ②调整和校正0T 保持暗箱开盖(光路闸门关闭)状态，调节波长选择旋钮选定所需单色光波长，及灵敏度旋钮选择合适的灵敏度档，然后调节0T旋钮使显示电表指针指在T=0(A=∞)处

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ③调整和校正100%T 盖上暗箱盖(光路闸门开启，空白溶液在光路中)，调节100%T旋钮使显示电表指针指在 T=100(A=0)处

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ④重复如下操作 ……打开暗箱盖 →调0T→盖上暗箱盖 →调100%T→…… 直至仪器稳定不变

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ⑤测量样品A值盖上暗箱盖(光路闸门开启)，拉动吸收池拉杆，使被测溶液依次置于光通路上，并在显示电表读取相应的吸光度值A(指针所指值)

第四节分光光度计 二、分光光度计的使用 721型分光光度计 2、使用方法与步骤 ⑥结束和复位测量完毕，关闭电源开关，拔下电源插头，取出吸收池，暗箱中放入干燥剂袋盖好，各个旋钮恢复原位，吸收池洗净后倒置于滤纸上晾干，再放回存放盒

Thank You！

知识 4 、分光光度计