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硕士研究生 开题报告

硕士研究生 开题报告. PTTG 在鼻咽癌中的表达及其与细胞周期的关系. 研究生 : 欧小波 导 师 : 陈小毅教授 副 导：赵颖海 广东医学院病理教研室. 一、立题依据. 鼻咽癌 : 遗传因素 EB 病毒感染 环境化学致癌物 1997 年 Pei 等分离出垂体瘤转化基因 (PTTG) 在鼻咽癌中的表达 ? 在鼻咽癌发生发展 ? 国内外还未见报道. （一）有关 PTTG 基因. PTTG 基因的结构 位于染色体 5q33, 全长超过 10kb 含六个外显子和五个内含子

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硕士研究生 开题报告

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Presentation Transcript

  1. 硕士研究生 开题报告

  2. PTTG在鼻咽癌中的表达及其与细胞周期的关系 研究生: 欧小波 导 师: 陈小毅教授 副 导：赵颖海 广东医学院病理教研室

  3. 一、立题依据 • 鼻咽癌:遗传因素 EB病毒感染 环境化学致癌物 • 1997年Pei等分离出垂体瘤转化基因(PTTG) • 在鼻咽癌中的表达? 在鼻咽癌发生发展? 国内外还未见报道

  4. （一）有关PTTG基因 • PTTG基因的结构 • 位于染色体5q33,全长超过10kb含六个外显子和五个内含子 • hPTTG cDNA序列由787bp组成 • 其作用依赖于表达水平异常

  5. 2. PTTG基因的表达和分布 • 垂体肿瘤、食管癌、肺癌等高表达,主要位于胞质,部分位于胞核 • 正常组织如脾、结肠等有弱表达甚至检测不到 • 鼻咽癌的表达情况未见报道

  6. （二）、PTTG基因与细胞周期 • PTTG的细胞周期依赖性表达 Yu R等发现胎盘JEG-3细胞中PTTG mRNA及蛋白的表达 G1/S期极低 S期开始升高 G2/M期达高峰

  7. 2.与姐妹染色单体分离的关系 （1）姐妹染色单体的分离 • 姐妹染色单体被粘合素粘着 • ESP1与安全子蛋白结合 • 有丝分裂中后期, APC将安全子蛋白泛素化而降解使ESP1活化,清除粘合素,姐妹染色单体得以分离

  8. pttg 安全子 安全子蛋白 安全子样蛋白 ESP1 后期促进复合物 粘和素 图、 PTTG与姐妹染色单体分离的关系

  9. (2)ESP1基因 • ESP1基因定位于Ⅷ号染色体,全长6662bp,蛋白质的N端和hPTTG高度亲和 • 罗勇军等证明了在G2/M期ESP1活化使姐妹染色单体分离

  10. (3) PTTG致瘤作用 • PTTG与安全子有同源性,过量表达突变型的安全子样蛋白,在有丝分裂中期不能降解 • 突变型的安全子样蛋白与ESP1结合,阻止ESP1清除粘合素,抑制姐妹染色单体分离,促非整倍体形成,导致肿瘤发生

  11. pttg 安全子 安全子蛋白 安全子样蛋白 ESP1 后期促进复合物 粘和素 图、 PTTG与姐妹染色单体分离的关系

  12. ?鼻咽癌 PTTG有否抑制姐妹染色单体分离? 与ESP1关系如何? 是否形成非整倍体?

  13. 3.有丝分裂检测点 • 研究表明大多数肿瘤表现出有丝分裂检测点功能缺陷 • 染色体未能与纺垂体正确结合时,纺垂体装配检测点系统被激活将有丝分裂阻断于中后期

  14. ? PTTG抑制姐妹染色单体分离,子代细胞非整倍体形成进一步发展为肿瘤的过程中是否涉及检测点功能缺陷?

  15. (三)PTTG的调控因子 • Heaney等发现,予雌激素,PTTG表达呈时间、剂量依赖方式增高 • 雌激素通过旁分泌诱导PTTG表达诱发成瘤作用 • 抑制雌激素则阻止肿瘤的生成,减少肿瘤细胞中PTTG的表达

  16. pttg 安全子 安全子蛋白 安全子样蛋白 ESP1 后期促进复合物 粘和素 图、 PTTG与姐妹染色单体分离的关系

  17. 研究目的 • 研究PTTG在鼻咽癌中的表达及其与细胞周期的关系,从细胞周期角度探讨鼻咽癌的发生的机制 • 研究影响PTTG表达和活性的调 控因子

  18. 拟解决问题 • PTTG、ESP1基因的mRNA和蛋白在鼻咽癌中的表达情况及其相关性 • PTTG对鼻咽癌细胞DNA含量、倍体和有丝分裂检测点功能的影响

  19. 二、研究内容 (一) 慢性鼻咽炎 鼻咽癌原发灶 淋巴结转移灶 PTTG、ESP1的表达 DNA含量和倍体分析

  20. (二) 鼻咽癌细胞系中 PTTG、ESP1的表达情况 DNA含量和倍体分析 有丝分裂检测点功能测定 (三) 体外培养细胞应用乙烯雌酚 观察其对PTTG、ESP1的影响

  21. 三、技术路线 • 分组 • 技术路线图 • 检测方法

  22. （一） 分 组 1.临床标本： 分慢性鼻咽炎 低分化鼻咽癌 鼻咽癌淋巴结转移灶 每组各30例

  23. 2.鼻咽癌细胞系： CNE1 CNE-2Z CNE-2Z-H5 3.乙烯雌酚体外实验： CNE1 CNE2Z CNE2Z-H5 给予乙烯雌酚10-8M

  24. (二)技术路线图

  25. 体外实验: 临床标本实验: 慢性炎 原发灶 转移灶 CNE1 CNE-2Z CNE-2Z-H5 乙烯雌酚(+) 乙烯雌酚(-) PTTG mRNA和蛋白 图象分析: DNA含量和倍体分析 ESP1 mRNA和蛋白 PTTG mRNA和蛋白的表达情况 ESP1 mRNA和蛋白的表达情况 图象分析: DNA含量和倍体分析 周期阻断、有丝分裂检测点功能测定 综合分析结果

  26. (三) 检测方法 PTTG检测 ◆RT-PCR ◆原位杂交 ◆ 免疫组织化学 ◆Western blot

  27. ESP1检测 ◆ 原位杂交 ◆ 免疫组织化学 DNA含量和倍体分析:图象分析技术

  28. 四、预期结果 (1)临床标本中PTTG高表达，与 ESP1有相关性；鼻咽癌存在非整倍体,与PTTG有相关性

  29. (2)在鼻咽癌细胞系中 ☉ pttg和esp1的表达均呈细胞周期依赖,两者存在相关性；鼻咽癌各细胞株PTTG的表达有差异 低分化的鼻咽癌细胞有非整倍体,有丝分裂检测点存在一定程度的缺陷,都与PTTG有相关性 ☉ 雌激素作用下,PTTG表达增加

  30. 五、进度安排 2005.07---2005.08 收集资料、写开题报告 和综述 2006.01---2006.03 收集标本,培养细胞 2006.04---2006.10 完成临床和体外实验 检测相关指标 2006.11---2006.12 处理和统计数据 2007.01---2007.04 撰写论文、答辩

  31. 六、经费预算 ◈ 细胞培养 2000 ◈ 免疫组化 3000 ◈ 原位杂交 3000 ◈ Western blot 3000 ◈ RT-PCR 4000 ◈ 其他预算 3000 ◈ 合计 18000

  32. 恳请各位老师批评指正

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