310 likes | 865 Views
به نام خداوند بخشنده مهربان. روش صحیح انجام آزمایش,بررسی عوامل ایجاد خطا و ارزیابی کیفیت کیت های الایزا. ایمونواسی یا سنجش ایمنی. اندازه گیری یا شناسایی مواد خاص بیولوژیک یا به عبارتی آنتی ژن یا هاپتن های خاص با استفاده از آنتی بادی اختصاصی ضد آنها. انواع واکنشهای سنجش ایمنی.
E N D
روش صحیح انجام آزمایش,بررسی عوامل ایجاد خطا و ارزیابی کیفیت کیت های الایزا
ایمونواسی یا سنجش ایمنی اندازه گیری یا شناسایی مواد خاص بیولوژیک یا به عبارتی آنتی ژن یا هاپتن های خاص با استفاده از آنتی بادی اختصاصی ضد آنها.
انواع واکنشهای سنجش ایمنی نشاندار: آنتی ژن یا آنتی بادی به کمک موادی مثل رادیواکتیو ، لومینسانس ، فلورسانس یا آنزیم نشاندار میشوند. مثال:RIA, EIA, Immunofluorescence غیر نشاندار:کمپلکس بزرگ و قابل مشاهده ای ازآنتی ژن و آنتی بادی ایجاد میشود. مانند واکنشهای رسوبی، آگلوتیناسیون، توربیدومتری
استفاده از تست های آزمایشگاهی در تشخیص عامل بیماری اهمیت به سزایی داشته و اتخاب مناسب کیت ها با توجه به حساسیت و ویژگی مهم است حساسیت بالینی: در صد احتمالی که یک روش آزمایش نتایج بیماران را مثبت جواب دهد. ویژگی بالینی: در صد احتمالی که یک روش آزمایشگاهی نتایج افراد سالم را منفی جواب دهد.
بررسی کيفيت کيت ها TP Sensitivity = ------------- TP+FN *100 TN Specificity = --------------* 100 TN+FP TP Predictive value of positive= -----------* 100 TP+FP TN Predictive value of Negative= ------------* 100 TN+FN
معیارهای آنالیتیکال حساسیت(sensitivity) : کمترین میزان آنالیت قابل اندازه گیری ویژگی(specificity):توانایی آزمایش در اندازه گیری یا شناسایی آنالیت مورد نظر در مجموعه ای از مواد یا آنالیت های ناهمگون دقت(precision): قدرت تکرار پذیری نتایج به دست آمده از یک نمونه. -دقت درون سنجی((intra-assay -دقت میان سنجی(inter-assay) صحت(accuracy):میزان نزدیک بودن میانگین آنالیت اندازه گیری شده به مقدار واقعی آن آنالیت.
انواع تستهای ایمونولوژیک مورد استفاده برای تشخیص بیماری های عفونی کمی نیمه کمی کیفی
تفسیر نتایج کیت های کیفی Cut off Mean Ratio (MR Value)
Analytical sensitivity= lower detection limit HBs Ag 0.5 ng/ml for (ad) and (ay)
بروشور مطالعه دقیق بروشور اولین و مهمترین گام در انجام تست الایزا میباشد.
آب مقطر استفاده از آب مقطر تازه چک کردن pH محلول شستشو
دما • دما یک عامل مهم در واکنش دهی و تکرار پذیری الایزاست • لزوم رساندن کیت به دمای اتاق • 10 درجه تغییر در دما معادل 2 برابر تغییر در فعالیت آنزیم • کریستالیزه شدن برخی stop solutionها • دمای سطح میز کار
قرار دادن پلیت ها در مرکز انکوباتور خارج کردن پلیت از کیسه مخصوص،پس از رسیدن به دمای اتاق دمای انکوباسیون زمان انکوباسیون
در برخی کیتها TMBدر DMSOحل شده ، و دمای ذوب DMSO، 18 درجه سانتیگراد است.پس محلول کروموژن باید به دمای 20-25 درجه برسد و قبل از استفاده خوب مخلوط شود.
برچسب • لزوم استفاده از برچسب 1-ممانعت از تبخیر 2-ممانعت از ورود گرد و غبار به چاهک • برچسب روی پلیت را در هر مرحله از انکوباسیون تعویض نمایید • هرگز پلیت را با فویل نپوشانید.
شستشو حجم محلول مورد استفاده طریقه رقیق سازی چک کردن دستگاه شستشو قبل از شروع کار اهمیت مرحله شستشو بخصوص در تست های بیماریهای عفونی بیشتر است.
Tapping هنگامیکه پس از شستشو پلیت را روی دستمال میکوبید از عدم وجود هر لکه رنگی روی دستمال مطمئن شوید.
تاریخ انقضاء تاریخ انقضای کیت باز شده الزاما با تاریخ انقضای درج شده بر کیت منطبق نیست. زمان باز کردن کیسه پلیت را روی همان کیسه قید کنید.
رانش(drift) رانش عبارت است از اختلاف در غلظت به دست آمده از یک نمونه واحد در موقعیت های مختلف یک پلیت در یک نوبت کاری. مهمترین علت رانش زیاد بودن تعداد آزمایش در یک نوبت کاری است. هنگام افزودن محلول به اولین چاهک زمان را اندازه گیری کنید. نقص در سیستم شستشو عدم آمادگی معرف های کیت از نظر درجه حرارت ،قبل از استفاده
کنترل و استاندارد حتما ابتدا کنترل منفی را در چاهک بریزید اگر اشکالی در نتایج کنترل یا منحنی استاندارد بود،حتما اقدام اصلاحی را انجام داده و یادداشت نمایید.