Transzglikozilálás v. transzglikozilezés

1. Transzglikozilálás v. transzglikozilezés Termék lehet: glikozid, di-, tri- ... poliszaharid. Akceptor: alkohol, mono-, di-...poliszaharid. melléktermék Glikozil donor : Aktiválthexóz:UDP-,GDP-glükóz hexóz-foszfát, di-, tri-... Poliszaharid (és aktivált…) Helyettesítettek is! Hexózamin, metilszármazékok…… Pseudomonas glükóz - 1 - P + fruktóz szaharóz + Pi 2. 4. -.- Glikoziltranszferázok 2.4.1.x : hexoziltranszferázok 2.4.2.x: pentoziltranszferázok

2. CH CH HOCH H OH H OH O H OH HO H O HO H O HO H O H OH H OH H O H H H CH2OH CH2 CH2OH Aspergillus niger maltóz+maltóz glükóz(1 6) glükóz(1 4) glükóz + glükóz donor akceptor 2 glükóz(1 4) glükóz

3. 60-as években 6 év: mikrobiológiai transzglikozilálási módszerrel több mint 30 oligoszaharidot ill. származékot szintetizáltak. Ez a szám megközelíti az E.Fischer óta kémiai módszerekkel nyert vegyületek számát.

4. Kapszuláris poliszaharidok: CPS intracelluláris szintézis sejtfal, tok-,kapszula-nyálka nem jelentősek Extracelluláris poliszaharidok: EPS intracelluláris, vagy sejtmembránon történőszintézis vagy biotranszformációval

5. Mikrobiális poliszaharidok: exopoliszaharidok CELLULÓZ Acetobacter gl CURDLÁN Agrobacterium gl gélek,élelmipar DEXTRÁN Neu Leuconostoc gl sokcélú Leván Bacillus, fr (fordított!) Leuconostoc Serratia marcescens PULLULÁN Pullularia pullulans gl 1,4-1,6 stat GLÜKÁN S.cerevisiae gl SCLEROGLÜKÁN NeuSclerotium glucanicum,,Sclerotium rolfsii gl ALGINÁT Pseudomonas aeruginosa, Macrocystis pyrifera poli-anhidro-β D-mannuronsav (1→ 4) illetve L-guluronsav Azotobacter vinelandii FOSZFOMANNÁN Hansenula capsulata XANTÁN SavXantomonas campestris gl glükuronsav!!! Poli-β-hidroxi-butirát Alcaligenes eutrophus(Ralstonia eutropha) PHB illetve PHA-k (valerát, kaproát stb) R O [ O – CH - CH2 - C ] Transzglikozilálás FRUKTÓZ96% SZA PHB

6. [1] Az első glükóz egységen O-acetil és gliceril csoport is van

7. Xantomonas campestris xantán M ≥ 106 Triszaharid oldallánc (polielektrolit) Olajkút Élelmiszer festékek Bioszintézis: CM-on, UDP-glükóz donor, GDP-mannóz Aktivált donorokkal

8. Transzglikozilálás Heterofermentatív tejsavbakt. DEXTRÁN Leuconostoc mesenteroides Dextrán szaharáz EC 2.4.1.5 1,6 SZAHARÓZ + n SZAHARÓZ DEXTRÁN + n FRUKTÓZ Alkoholos kicsapás fruktóz NB.: NINCS HIDROLÍZIS A TR.GL. ELŐTT!!! Elágazás: branching enzyme Dextranáz enzim: cukoripar,(kül.moltömeg) dextrán gl + oligoszaharidok 1,3 1,4 1,2 Pharmacia: Sephadex Pharmacia →Pfizer 2006

9. 6 1 6 1 n L.mesenteroides n+1 dextrán-szaharáz Szaharóz + ((1 6)-α-D-glikozil).(n) n.D-fruktóz + ((1 6)- α-D-glikozil).(n+1) Elágazások: branching enzyme 1,3 1,4 1,2 –glikozid kötések

10. Ciklodextrin A ciklodextrinek nem redukáló, kristályos, vízoldható ciklikus oligoszaharidok: 6,7 v 8 glükóz egységből állnak. Szintézis: CGTase (EC 2.4.1.19 cyclodextrin glucanotransferase): α-1,4 glikozil láncokra hat, azaz keményítőből: amilózból, amilopektinből és glikogénből képes CD-t előállítani. Előbb α-amilázos kezelés.8-10% elfolyósított oldat +CGTase 55oC, 5,8-6,6pH, szakaszos reaktor. Keverék képződik( pl: 22% α, 11% β, 5% γ), elválasztás vízoldhatóság alapján vagy szelektív adszorpcióval. Az enzimet pl. Bacillus circulans-szal állítják elő.

12. Belül inkább hidrofób γ-CD β-CD progeszteron OH csoportok kívül Vendég molekulák: aromások, alkoholok,halidok, zsírsavak észterek, stb

13. KONDENZÁCIÓ,ADDÍCIÓ,Csoport eltávolítás (liázok) 1921 80% Szimpatikus Idegizgatószer Asztma, Taxol oldallánc

14. (Tyr dezaminálás) Erwinia herbicola sejtszuszpenzióval (EC 4.1.99.2) (diOH-Phe) +enziminhibitor! Parkinson-kór: DOPAMIN v. receptorhiány az agyban biogén amin, neurotranszmitter Együtt a gyógyszerek

15. EC 4.2.1.84 monomer koagulátor talajkondícionáló papírgyártás Cu-katalízis Rhodococcus rhodochrous immob. sejtjei fehérbiotech 1984, Mitsubishi Rayon Óriás enzimek: 4-5 alegység, 130000 D 18-20 520000 D Optimális hőmérséklet 35oC de 10oC-on végzik a reakciót! 100000t/Év Nitto:rátáplálásos eljárás 2.106 U/dm3 80 kg/m3h produktivitás 99,9% konverzió Szűrés, színtelenítés

16. EC 4.2.1.2. L-aszpartát-ammónia liáz(4.3.1.1 ) FUMÁRSAV Egyensúlyi keverék: 85% almasav, 15% fumársav, de: 1% oldhatóságú Ca-fumarát a szubsztrát. Ez a szintén 1% oldhatóságú Ca-maláttá alakul , kicsapódik az oldatból egyensúly eltolódik a képződés irányába (Ezt a módszert s l u r r y biokonverziónak nevezik, hasonlít a szteroid pszeudokristály fermentációra). Corynebact. glutamicum Brevibacterium flavum sejtekkel E. coli enzim rögzítve, vagy Brevibacterium flavum rögzített teljes sejt Iparilag is alkalmazott L-aszparaginsav előállítási módszer ( Kyowa Hakko Kogyo) szakaszos és folytonos dugóáramú reaktorban megvalósított folyamatok, konverzió 99% feletti. aszpartám alapanyag

17. Izomerizálás (EC 5.x.x.x) glükóz izomerizációja fruktózzá Édesség: 70-75% 200% 100% 130 % szaharóz Potenciális enzimek:

18. Izomerizálás 2 Potenciális enzimek: • Gl-P-izomeráz (EC 5.3.1.9. D-Glucose-6-phosphate-ketol-isomerase) • E.intermedia • Aerobacter aerogenes • Aerobacter cloaceae As (arzenát) Glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18. D-glucose-ketol-isomerase) Heteroferm. tejsavbacik kis hőfokoptimum D-xylóz-izomeráz (EC 5.3.1.5. D-xylose-ketol-isomerase) Előnyök: kis pH opt.(pszikóz) nagy fajlagos aktivitás hőfokoptimum 80oC (nincs koenzim) IPARI Bacillus coagulans (NOVO) Arthrobacter sp. (ZENECA) Actynoplanes missouriensis (GIST-BROCADES) Streptomyces albus (MILES Lab.)

19. Izomerizálás 3

20. Izomerizálás 4 1 kg enz, 18000 kg gl. 55-60oC, WHOLE-CELL Gl-izomeráz SWEETZYME tenyésztés és sejthomogenizálás(=sejtfeltárás!), a sejteket keresztkötés létesítéssel rögzítik, porlaszva szárítás→ enzim-por, fagyasztva szárítás → enzim-pelyhek extrudált enzim-rudacskák Konverzió szakaszos üzemű és fixágyas töltött oszlop reaktorokban. Mg , Co Ca 1 mg 42:51:7 70% sza.: 42% fr 53% gl HFS Kromatogr.: akár 90 % fr

21. Zeneca S D D’Sousa: Immobilized enzymes in bioprocesses, Current Science Online 77(1) 69

22. Izomerizálás 4 Magyarországon 1978-82 között Szabadegyházán 4 Milliárd forintos beruházással egy évi 140.000 tonna kapacitású kukoricafeldolgozó üzem létesült. Komplex kukorica hasznosítás • Folyékony cukor 49.500 t sz.a./év • Finom szesz 200.000 absz. hl/év • Kukoricacsíra 10.000 t/év • Glutén 6.300 t/év • Takarmány 30.000 T/év első folyékony cukor üzem Európában. BIOREFINERY

23. RESZOLVÁLÁS Racém keverék

24. RESZOLVÁLÁS Fermentáció: L Enzimes szintézis:L Szintetikus eá.: D,L Jelentősége:AS

25. RESZOLVÁLÁS 1. Asszimetrikus szintézis : i-Leu, Lys,Met,Phe,Trp,Val Peptid kötés!

26. RESZOLVÁLÁS 2.Asszimetrikus hidrolízis Aspergillus v. Penicillium L-As-aciláz-zal acilezés As-aciláz D,L- As D,L-acetil-As L-As + D-acetil-As kristályosítás OH- racemizálás D,L- As (Kromatogr.v Oszeres extr.) Ez volt az első ipari alkalmazása az enzimrögzítésnek (Chibata 1969).Aminoacilázt rögzítettek DEAE-Sephadex-re ionosan és ezt N-acyl-D, L-aminosav rezolválására használták

27. RESZOLVÁLÁS

28. RESZOLVÁLÁS 3. Speciális módszer glutaminsavra H+

29. Hibás ábra!!! OH Pseudomonas putida amidáz EC 3.5.1.4 Amidázos reszolválás „nemtermészetes aminosavak” előállítására (DSM) un Stecker technológia)

30. Reszolválás lipáz enzimekkel Lipáz források: sertés pankreász mikrobák (Pseudomonas fluorescens, Candida cylindracea, stb) enzimei. EC 3.1.1.3Triacylglycerol lipase „Dutch State Mines” A PROPRANOLOL béta-blokkoló DSM eljárása: racém glicidáttá prokirális A kinetikus racemizálási kulcslépés során visszamaradó (R)-észter racemizálható és visszavezethető a reszolválási lépésbe. Ilyen és hasonló lipáz-katalizálta sztereoszelektív észter hidrolízisek tömegét alkalmazzák a gyógyszer-laborok és gyárak optikailag tiszta intermedierek és végtermékek előállítására