150 likes | 442 Views
T ehnologija rekombinantne DNK - g enetičko inženjerstvo. Skup in vitro tehnika kojima je omogućeno stvaranje himernih molekula DNK Kloniranje gena: Izolovanje gena iz organizma Prebacivanje u manje genome - vektore za kloniranje Ubacivanje u ćeliju domaćina
E N D
Tehnologija rekombinantne DNK-genetičko inženjerstvo • Skup in vitro tehnika kojima je omogućeno stvaranje himernih molekula DNK • Kloniranje gena: • Izolovanje gena iz organizma • Prebacivanje u manje genome - vektore za kloniranje • Ubacivanje u ćeliju domaćina • Amplifikacija gena u domaćinu ili ekspresija stranog proteina u domaćinu • Primena u istraživanju ili komercijalnoj proizvodnji korisnih produkta
Restrikcione endonukleaze tipa II • Najčešći tip kod bakterija • Dimeri, seku dvolančanu DNK asimetrično na palindromskim sekvencamakoje nisu modifikovane • Dobijaju ime prema bakteriji iz koje su izolovane (EcoRI, HindIII, BsuRI, BamHI itd) ..G׀AATTC.. .G AATTC.. GAATTC ..C TTAA׀G.. .CTTAA G.. CTTAAG • Produkuju molekule različite dužine sa jednolančanim komplementarnim krajevima
Dobijanje himernih DNK molekula • Tretiranje izolovane DNK restrikcionom endonukleazom • Tretiranje izolovane DNK vektora istim enzimom • Povezivanje molekula pomoću DNK ligaze • Ubacivanje u ćeliju domaćina transformacijom
Osobine vektora za kloniranje • Mali dobro okarakterisani DNK molekuli (do 10 kbp) • Autonomno se repliciraju u domaćinu i prenose u ćerke ćelije • Imaju selektabilne genetičke markere • Imaju jedno restrikciono mesto
Vektori za kloniranje • Plazmidi, derivati prirodnih • Virusi, uglavnom bakteriofagi • Kozmidi • Veštački hromozomi • Ekpresioni vektori • Šatl vektori