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血液中の PCB 全異性体分析. 平井 哲也*， 藤峰 慶徳*， 中野 武** *：大塚製薬株式会社 大塚ライフサイエンス事業部 EDC 分析センター **：兵庫県立環境健康科学センター. はじめに PCB は生物学的に安定かつ生体内の脂肪に蓄積されや すい事から過去に使用され環境中に放出された PCB が 食物連鎖を通じてヒトに蓄積されている．毒性としては， コプラナー PCB においてダイオキシン類としての毒性が ある．しかし， TEF を持たない PCB についてもダイオキシン 類毒性とは異なる内分泌撹乱作用があるとの報告 もある．
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血液中のPCB全異性体分析 平井 哲也*， 藤峰 慶徳*， 中野 武** *：大塚製薬株式会社 大塚ライフサイエンス事業部 EDC分析センター **：兵庫県立環境健康科学センター
はじめに PCBは生物学的に安定かつ生体内の脂肪に蓄積されや すい事から過去に使用され環境中に放出されたPCBが 食物連鎖を通じてヒトに蓄積されている．毒性としては， コプラナーPCBにおいてダイオキシン類としての毒性が ある．しかし，TEFを持たないPCBについてもダイオキシン 類毒性とは異なる内分泌撹乱作用があるとの報告 もある． PCB分析用に開発されたHT8-PCBカラムを用い HRGC/HRMSにてヒト血液中PCB 全異性体分析を行った． インフォームドコンセントの得られた健常人血液 (n=24， 男女各12名，年齢25～46才)を用いて分析を行い， 健常人血液中に検出した異性体の解析と臨床検査との 相関関係について検討を行ったので報告する．
13C12-PCBs Internal standard solution 13C12-PCBs syringe spike solution 血液からのPCB抽出・クリーンアップ 脂肪抽出 （加算法） Blood15 ml 2 M-KOH/Ethanol 10 mL Serum 0.5ml Shaking 120 min Kit Method Ethanol 4 mL Water* 8 mL n-Hexane 15 mL Weigh at lipid Extraction with n-Hexane 15 mL under shaking 30 min Hexane phase Water phase n-Hexane phases (2 times) are set to one Washing up by water* 10 mL(x2) *:Water was washed up by n-Hexane Dehydration by Sodium sulfate anhydrous and concentrate Multilayer silica gel column chromatography 10%DCM / n-Hexane (V/V) 100 mL HRGC/HRMS measure （AutoSpec-Ultima） PCBs are concentrated to 40μL under nitrogen gas in GC vial.
The Conditions of Measurement Method for PCBs Instruments HRGC / HRMS HP6890series (Hewlett Packard) / AutoSpec-Ultima ( micromass ) Analysis conditions InjectionTemp.290 ℃Flow1 ml / min. (constant flow) Column HT8-PCB (Kanto Chemical Co., INC.,) 60 m x 0.25 mm I.D. Oven Temp. mono ~ penta120 ℃ ； 20 ℃ / min.；180 ℃，0 min.； 2 ℃ / min.； 252 ℃ ； 50 ℃ / min.；310 ℃ ，5 min. hexa ~ deca 120 ℃ ； 20 ℃ / min.；180 ℃，0 min.； 2 ℃ / min.； 260 ℃ ； 5 ℃ / min.；310 ℃ ，5 min. InterfaceTemp.290 ℃ SourceTemp.280 ℃Electron Energy 35 eV Resolution 12000
BZ Number （ Ballschmiter K and Zell M , 1980 ) BZ # IUPAC # 107 109 2,3,3',4',5-Penta CB 108 107 Penta CBs 2,3,3',4,5'-Penta CB 109 108 2,3,3',4,6-Penta CB 199 200 2,2',3,3',4,5,6,6'-Octa CB 200 201 Octa CBs 2,2',3,3',4,5',6,6'-Octa CB 201 199 2,2',3,3',4,5,5',6'-Octa CB
40 y = 0.871x + 3.09 R= 0.94 TEQ concentration by n-hexane extraction (pgTEQ/g-lipid) 30 20 n=32 10 40 10 20 30 TEQ concentration by the adding method (pgTEQ/g-lipid) 脂肪重量測定：The adding method（加算法）* TL = 1.69 × (TC - FC) + FC + PL + TG TL : Total lipid TC : Total cholesterol FC : Free cholesterol PL : Phospholipid TG : Triglyceride 2003年環境化学討論会 望月氏発表データ 脂肪抽出法（暫定マニュアル法（ヘキサン抽出）と加算法（Kiｔ））の違い による血中ダイオキシン類測定値（pg/TEQ/g-lipid）の相関 * : H. Kobayashi, Medical technology, 12(8): 1004～1007, 1980
健常人血液中のPCB測定結果（主異性体・総濃度）健常人血液中のPCB測定結果（主異性体・総濃度）
＃28 Tri-CBs ＃31 Tetra-CBs ＃74 ＃80 Penta-CBs ＃118 ＃99 ＃153 Hexa-CBs ＃163/ ＃164 ＃138 Hepta-CBs ＃180 ＃182/187 ＃170 健常人PCB血液クロマトグラム（3~7塩素）
(n=24) Congeners Mean 2S.D. ± Existence Ratio* (BZ#) (ng /g-lipid) (%) #153 28.0 28.0 22.3 ± #180 14.9 16.6 11.8 ± #138 10.4 9.2 8.3 ± #182,187 8.3 8.5 6.6 ± #118 6.9 5.9 5.5 ± #163,164 6.4 6.2 5.1 ± #99 4.7 4.2 3.8 ± #74 4.6 2.6 3.6 ± #146 4.1 3.7 3.3 ± #170 3.8 4.1 3.0 ± #156 2.8 3.0 2.3 ± Sum 75.6 * Mean is compare to total PCBs level Levels of the predominant PCB congeners in human blood
PCB異性体濃度と臨床検査結果との相関係数 臨床検査 ： 年齢 ・ 性別 ・ 遊離T3 ・ 遊離T4 ・ TSH ・ 遊離コレステロール ・ 総脂質 ・ リン脂質 ・ 中性脂肪 ・ 総コレステロール
まとめ ・HRGC / HRMSとHT8-PCB カラムを用いてPCB全異 性体分析を行い健常人血液中PCB異性体の解析を 行った. 血液中の主要なPCB異性体は2,4,5-位に塩素が 置換したもの（#153,138,118,180,187,74,99）を高濃度 に検出した. ・血液中総PCB濃度と主異性体について年齢・臨床 検査結果との相関係数について解析した． ① 年齢については解析したすべての異性体で有意 な正の相関関係を認めた. ② TSHについても総PCBと数種異性体において若干 正の相関関係を認めた. ③ 他の臨床検査値とは，特に相関を認めなかった．
