实验二凝血酶原时间测定

实验二凝血酶原时间测定

一、试管法 【目的】掌握凝血酶原时间测定的试管法。【原理】 PT是在体外满足外源性凝血全部条件后的血浆凝固所需的时间。在抗凝血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转化为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。测定从加入Ca2+到血浆开始凝固所需时间，即为PT。

【操作】 1．分离乏血小板血浆 2．平衡温度 3．温浴 4．测定正常参比血浆的PT 5．测定待检血浆的PT 6．报告方式

【注意事项】 1．试剂由于不同来源、不同制备方法的组织凝血活酶对结果影响很大，造成结果的可比性差，特别影响判断口服抗凝剂的治疗效果。世界卫生组织(WHO)提出以人脑凝血活酶67/40批号作为标准品，并以ISI表示各种制剂与67/40之间的相互关系。67/40为原始参考品，定67/40的ISI为1.0。市场上供应的组织凝血活酶试剂应注明ISI值，选用ISI<2.0的组织凝血活酶为宜。 2．标本 (1)应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器械收集标本，如硅化试管、硅化注射器等。所用试管必须洁净、干燥、无划痕。 (2)采血要顺利，否则可激活凝血因子。静脉压迫时间过长可引起局部纤溶活化。 (3)采血后应仔细检查标本有无溶血、黄疸、脂血和血凝块，任何微小的凝块都会影响测定结果，必须重新采血。溶血的血浆可导致凝血时间假性缩短。部分凝血可导致凝血时间假性延长。

(4)血液与抗凝剂要充分混匀。血液与抗凝剂比例 ( 9:1 ) 要准确。枸椽酸盐比例过高或过低，都会影响PT测定结果的准确性。 (5)采血后宜在1h内完成测定。血浆在4℃保存不应超过4h ，-20℃可保存14d，-70℃可保存6个月。 (6)血细胞比容（Hct）小于0.2或大于0.5时，应按下式调整抗凝剂的用量：抗凝剂(m1)=（100－Hct）×血液 (m1)×0.00185。 (7)由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同，测定的条件也略有变动，故每次测定均需有正常对照。 (8)分离血浆时离心条件要确保。以3 000 r/min 离心10min，以获得乏血小板的血浆；如果血浆中富含血小板，可导致凝血时间假性缩短。

3．温浴水浴温度要控制在 (37.0±0.5) ℃，温度过高或过低都可影响测定结果。温度过高，凝血时间缩短；温度过低，凝血时间延长。 4．测定 (1)检测方法要规范化，尽量采用国际血栓和止血委员会（ICTH）及国际血液学标准化委员会（ICSH）公布的参考方法。 (2)先测定正常参比血浆的凝血酶原时间，结果在正常允许范围内才测定待检者血浆。 (3)所有标本均做2～3次测定，结果相差应小于5％。若2个结果相差大于5％，再做1次单份或双份测定，取相近2个结果的均值报告。

5．报告方式 目前PT报告方式有PT、PTR和INR。前两者存在的偏差较大，对临床上指导口服抗凝药物冶疗用量有一定危险性，且难以开展室间质量评价。因此在报告PT、PTR的同时，为了标准此类待检者凝血功能的表述，应按ICTH及ICSH的建议报告INR。影响INR的因素较多，主要有：①ISI：ISI值越大，试剂的敏感性就越低，PTR换算成INR值的误差也就越大；②试剂对凝血因子缺乏的反应性的差异；③不同凝血活酶测得PTR的精确性不同。

二、血凝仪法 【目的】　掌握凝血酶原时间的血凝仪测定法。【原理】　同试管法。

【操作】 1．分离乏血小板血浆 2．平衡温度 3．预温 4．测定正常参比血浆的PT 5．测定待测血浆 6．报告方式

【注意事项】 1．规范操作 2．PT的仪器法测定由半自动或全自动血凝仪完成，全自动血凝仪的准确性和精密度高。不同仪器及试剂测定同一血浆，其PT也有一定差异，但INR应一致。血凝仪的检测原理也不尽相同。常用的有比浊法、黏度法。 3．其他　同试管法。

实验二 凝血酶原时间测定