1 / 34

Anaeróbna kultivácia

Anaeróbna kultivácia. Baktérie vo vzťahu ku kyslíku Anaeróbne infekcie - odber a transport

nash
Download Presentation

Anaeróbna kultivácia

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Anaeróbna kultivácia • Baktérie vo vzťahu ku kyslíku • Anaeróbne infekcie - odber a transport • Kultivácia - vytvorenie anaeróbneho prostredia - kultivačné médiá pre anaeróbnu kultiváciu - inokulácia, izolácia, hodnotenie

  2. Baktérie a kyslík • Obligátne aeróbne - vyžadujú plynný kyslík, nerastú bez neho • Obligátne anaeróbne - kyslík je pre ne toxický. Využívajú metabolické dráhy - fermentačné s produkciou zapáchajúcich konečných produktov. • Fakultatívne anaeróbne - schopné metabolizovať za aeróbnych aj anaeróbnych podmienok • Mikroerofilné - vyžadujú znížený tlak kyslíka

  3. Anaerobic Respiration = Glycolysis + Fermentation NAD NADH ATP NAD NADH

  4. Anaeróbne infekcie • Obvykle spôsobené endogénnymi baktériami pri porušení ekologickej rovnováhy fyziologickej flóry (ATB a mikroflóra čreva) alebo pri nezvyklej lokalizácii (prechod anaeróbnych baktérii při perforácii čreva na peritoneum - anaeróbna peritonitída) • Exogénne anaeróbne baktérie - kontaminácia rán • Exudáty, hnis, obsah dutín • Odoberanie vzoriek, transport - za anaeróbnych podmienok - aspirát do striekačky s hermeticky uzavretým kónusom. Chirurgický odber vzorky je často potrebný. Nepoužívajú sa suché tampóny!

  5. Odber materiálu

  6. Vytvorenie anaeróbneho prostredia • Sviečkový exikátor - mikroaerofilné prostredie, fakultatívne anaeróbne baktérie • Anaeróbne prostredie - sklená nádoba s vyvíjačom atmosféry ( vo folii uzavretom): uvoľňuje vodík a kysličník uhličitý (po pridaní vody ) + obsahuje katalyzátor, ktorý musí byť pravidelne regenerovaný. Prikladajú sa indikátory anaerobiózy. • Anaerostat - kovová fľaša s možnosťou vytvorenia anaeróbnej atmosféry • Biologické metódy - súčasná kultivácia s baktériou Serratia marcescens • Skúmavkové bujónové média (thioglykolát, mäsový bujón) - obsahujú redukujúce súčasti, ktoré vytvoria anaeróbne prostredie v spodnej časti skúmavky - ak sú čerstvé a dobre uzatvorené - regenerácia - 15 minút vo vriacej vodnej lázni s odskrutkovaným uzáverom na uvoľnenie rozpusteného kyslíka a opätovným schladením pri zaskrutkovanom uzávere.

  7. Kultivačné médiá • Krvný agar • krvný agar obohatený o rastové faktory a antibiotiká (selektívne inhibujúce väčšinu aeróbnych a fakultatívne anaeróbnych baktérií) • VL bujón, agar • Skladovanie v chlade v uzavretej nádobe, používať len čerstvé médiá.

  8. Biologická metóda • Polovica povrchu pevnej pôdy v Petriho miske sa naočkuje vzorkou a druhá polovica baktériou Serratia marcescens, ktorá spotrebovaním kyslíka vytvára anaeróbne prostredie. Okraje sa misky sa zalejú • parafínom a kultivuje sa v aeróbnom prostredí. vzorka ------------------- ----------------------- Serratia marcescens

  9. Inokulácia a izolácia • Inokulovať bez odkladu • Založiť aeróbnu aj anaeróbnu kultúru • 48 hodinová kultivácia • Často zmiešaná infekcia • Porovnanie aeróbnej a anaeróbnej kultivácie • Gramovo farbenie: základom je dôkaz anaeróbnej flóry: G+koky, G+paličky, G- paličky, G- koky, sporulácia

  10. Algoritmus • anaerobna aerobna kultivácia • anaerobne • fakultatívne anaerobne • aerobne

  11. Mikroskopický dôkaz Preparát z kultúry Cl.perfringens, Gram Cl.septicum, Wirtz-Coonklin B.fragilis, P.acnes, Gram B.fragilis , Burriho tušová metóda

  12. Clostridium septicum

  13. Bacteroides Gram

  14. C. botulinum

  15. Botulism Toxin Mechanism

  16. Chabá obrna-botulismus

  17. C. Tetani

  18. tetanus

  19. Kultivačný dôkaz Súprava ANAER-KULT

  20. C. tetani colony on SBA

  21. Biochemický dôkaz ANAERO-TEST

  22. Reverse CAMP Test Clostridium perfringens Group B Strep hemolysis

  23. reverse CAMP” result of C. perfringens (a, b & c) Called “reverse CAMP” because S. agalactiae is the primary or central streak in this case rather than S. aureus.

  24. Nagler Test C.perfringens band streaked on Egg Yolk Agar Antitoxin placed on right half of plate before inoculation and incubation Cloudy precipitate caused by lecithinase produced by C. perfringens Cloudy precipitate does not form because lecithinase is neutralized by anti-lecitinase

  25. Nagler test:

  26. Serologický dôkaz BWR Nelsonov imobilizačný test

  27. Arnon S, et al. JAMA. 2001;285:1059-70.

  28. Double zone hemolysis

  29. OS = outer sheath AF = axial fibrils Leptospira interrogans AF Spirochete

  30. Cross-Section of Spirochete with Periplasmic Flagella Cross section of Borrelia burgdorferi (Outer sheath)

  31. Spirochaetales Associated Human Diseases

  32. Darkfield Microscopy of Treponema pallidum

More Related