260 likes | 553 Views
STRUKTURA NUKLEOVÝCH KYSELIN. Kolektiv Laboratoře molekulární biologie Onkologické centrum J. G. Mendela Nový Jičín. Primární struktura nukleových kyselin. Cukr b -D- ribóza (RNA) b -D -2-deoxyribóza (DNA). Báze A – adenin G – guanin C – cytozin T – tymin U – uracil.
E N D
STRUKTURA NUKLEOVÝCH KYSELIN Kolektiv Laboratoře molekulární biologie Onkologické centrum J. G. Mendela Nový Jičín
Primární struktura nukleových kyselin Cukrb-D-ribóza (RNA) b-D-2-deoxyribóza (DNA) Báze A – adenin G – guanin C – cytozin T – tymin U – uracil Kyselina fosforečná Nukleozid (báze + cukr) Nukleotid (nukleozid + fosfát) (báze + cukr + fosfát)
Cukerné složky nukleotidů b-D-ribóza b-D-ribofuranóza (RNA) b-D-2-deoxyribóza 2-deoxy-b-D-ribofuranóza (DNA)
Báze Pyrimidiny Puriny Tymin Adenin Cytozin Guanin
Báze vodíkové vazby guanin - PURIN cytozin - PYRIMIDIN vodíkové vazby tymin - PYRIMIDIN adenin - PURIN uracyl- PYRIMIDIN RNA: uracil místo tyminu
Chargaffovo pravidlo Molové množství adeninu v molekule DNA se rovná molovému množství tyminu a molové množství cytozinu se zodpovídá molovému množství guaninu. Např.: je zjištěn 17% výskyt adeninu v DNA 17% adeninu = 17% tyminu (34%) 66% (33% cytozinu a 33% guaninu)
Nukleozidy A G T C adenin guanin tymin cytozin (adenozin) (guanozin) (tymidin) (cytidin) puriny pyrimidiny
Nukleotidy dATP dCTP dGTP dTTP UTP
A 5´-konec oligonukleotidu glykozidová vazba C Oligonukleotid fosfodiesterová vazba G T 3´-konec oligonukleotidu
Párování bází T - A Tymin Adenin C - G Cytozin Guanin
Párování bází A - T G - C adenozin - tymidin guanozin - cytidin (adenin - tymin) (guanin - cytozin)
Sekundární struktura nukleových kyselin 5´-konec 3´-konec Párování bazí A T C G Sekvence bazí nukleotid CpGpCpGpApTp… 5´-konec 3´-konec
Sekundární struktura nukleových kyselin 3´-konec DNA 5´-konec antiparalelní vlákna fosfát deoxyribóza 5´-konec 3´-konec
Charakterizace nukleových kyselin • fosfátové estery jsou silné kyseliny a chovají se jako anionty při neutrálním pH • 2) DNA se snadno precipituje alkoholem • 3) báze jsou jen slabě bazické a bez náboje
Charakterizace nukleových kyselin 4)vodíkové vazby mezi skupinami -NH2 a -OH jsou stabilní od pH 4 do pH 9.5 5) DNA absorbují UV světlo maximálně při 260 nm (ssDNA dává o 20-30% větší absorbanci než dsDNA) 6) DNA je mimořádně stabilní 7) konformace DNA: A, B, Z
Sekundární struktura nukleových kyselin A T A U G C G C báze pár bazí páteř cukr-fosfát RNA DNA ribonukleová kyselina deoxyribonukleová kyselina
Sekundární struktura nukleových kyselin Konformace DNA větší žlábek menší žlábek
Sekundární struktura nukleových kyselin Z-DNA Konformace DNA cukr-fosfátová páteř Zvýšení na jeden závit 2.5 nm báze menší žlábek větší žlábek
Spiralizace DNA dsDNA 2 nm „beads-on-a-string“ 11 nm (korálky na niti) 30 nm chromatinové vlákno 30 nm relaxovaná oblast chromozómu 300 nm kondenzovaná oblast chromozómu 700 nm mitotický chromozóm 1400 nm
Spiralizace DNA Histon H1 DNA (146 + cca 60 bp) Nukleozom Histonový oktamer
chromatidy jádro Spiralizace DNA teloméra centroméra chromozóm teloméra párované báze histony dsDNA
Chromozóm duplikovaný oblast centroméry Délkový poměr: chromozóm – DNA 1 – 50 000 chromatidy
Mitóza lidských chromozómů G – banding (trypsin/Giemsa)
Karyotyp (G-banding)