O composto E6446 aumenta sobrevivência dos animais infectados com malaria.

1. O composto E6446 poderia proteger animais de desenvolver malaria cerebral e também alterar o perfil de citocinas? iRBC (P. berghei ANKA) Sobrevivência - Citocinas no soro (ELISA) - Parasitemia Sangue 12 1 E6446 (120mg/Kg) - Citocinas no sobrenadante (ELISA) Baço Cultivo com LPS ou CpG O composto E6446 aumenta sobrevivência dos animais infectados com malaria.

2. Qual o efeito do E6446 nas células dendríticas de camundongos infectados com P. berghei? E6446 (120mg/Kg) - via oral 6p Extração do baço e obtenção celular Células dendríticas infecção Análise da produção de citocinas pelas DC (citometria) iRBC (P. berghei ANKA) A infecção pelo Plasmodium aumenta a produção de TNF- e o tratamento com E6446 pode reduzir esta citocina produzidas pelas DC.

3. E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral 3 5 7 12 • Sobrevivência iRBC (P.berghei ANKA) Qual o efeito do E6446 em animais com malaria cerebral estabelecida? E6446 é eficiente no estágio inicial da malaria cerebral.

4. Camundongos 3d Mutação UNC93B1 Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais? Akira, S. Takeushi, O. 2010.

5. iRBC (P. berghei ANKA) Camundongos 3d Perfil de citocinas (Citometria) Sobrevivência Parasitemia Mutação UNC93B1 Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais? Os camundongos deficientes na resposta para TLR3, 7 e 9 apresentaram resultados semelhantes aos obtidos por animais infectados e tratados com E6446.

6. O tratamento de camundongos com E6446 pode atenuar os sintomas da malária cerebral? E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral 12d Score clínico 12 Tempo de infecção 7d iRBC (P.berghei ANKA) 200l A.evans (1%) Morte e retirada do cérebro 1h depois Desequilibrio - 6 Paralisia - 8 Coma,convulsão e morte - 10 Análise cerebral O tratamento com E6446 de camundongos infectados com malaria significativamente diminuiu os focos de derrame cerebral.

7. Conclusão... O composto E6446 • Não altera a parasitemia nos animais; • Inibe a ativação de TLR endossomais (7 e 9); • Reduz a responsividade dos TLRs ativados em animais com malaria; • Reduz a produção de citocinas tais como IFN-γ, TNF-α, IL-6; • Aumenta a sobrevida de camundongos infectados com malaria; • Atenua os sintomas de malaria cerebral. O E6446 atua como antagonista de TLR sensíveis a ácidos nucleicos (endossomais) e pode ser uma alternativa para prevenção de malaria cerebral.

8. Pressão seletiva: Proteção contra Malária Grave x Efeitos deletérios

9. Polimorfismo FCγRIIB  Deficiência + Comum em Africanos, relacionado com LES em descendentes fora da Africa; • Willcocks et al. (2010) – Crianças africanas que possuíam proteção contra malária grave, possuíam alguma perda de função nesse receptor Será que a susceptibilidade ao LES está relacionada à proteção frente às formas graves da Malária?

10. Camundongos com predisposição ao LES são protegidos contra a forma cerebral de Malária? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei % Sobrevivência, Parasitemia

11. Camundongos com predisposição ao LES são protegidos contra a forma cerebral de Malária? Kidney Inflammation WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei WT Brain Pathology Os animais propensos ao LES sobrevivem por mais tempo, resistem à parasitemias maiores e não apresentam sinais de edema cerebral Peso órgão, Score Clinico Brain

12. Camundongos com predisposição ao LES também são protegidos contra a forma não cerebral de Malária? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x104 P. yoelii Camundongos propensos ao LES não são protegidos no caso de malária grave não cerebral % Sobrevivência, Parasitemia

13. O aumento da expressão de TLR7 ou a deficiencia de FCγRIIB protegem contra a forma cerebral de Malária de forma independente? WT, TLR7.tg ou FCγRIIB -/- Ambos os camundongos TLR7.tg e FCγRIIB-/- demonstram proteção contra as formas graves de malária I.P. 1x106 P. berghei % Sobrevivência, Parasitemia, Score Clínico Brain microhemorrhagies

14. Qual é o perfil de produção de citocinas nos camundongos propensos ao LES? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei Citocinas (soro) ELISA

15. 172 9, 9, 10, 10, 11, 20, 25, 50, 200 10, 100, 150, 160, 160, 200, 220, 250, 300 o 200 300 100 150 50 50 o 10 10

16. Qual é o perfil de produção de citocinas nos camundongos propensos ao LES? WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei Citocinas (soro) ELISA A proteção dos animais propensos ao LES provavelmente se deve aos níveis elevados de IL-10 antes, e os baixos níveis de citocinas inflamatórias após a infecção

17. Qual o padrão celular no baço dos animais propensos ao LES? Germinal center B cells Plama cells Activated B Cells Activated Helper T Cells Inducible Costimulator Activated T Cells Activated Cytotoxic T Cells Macrophages, DC WT ou FCγRIIB -/- .Yaa I.P. 1x106 P. berghei 7 dias Características de infecção crônica controlada antes da infecção, presença de células Foxp3+ após, deve conferir resposta controlada Quantificação de células Citometria CD4+ ICOS High ↑ IL-2, IL-3 e IFN-γ

18. Qual o padrão de resposta no cérebro dos animais infectados? Quantificação de células (Citometria), Real Time PCR WT ou FCγRIIB -/- .Yaa 7 dias IL-10 IL-12 TNF I.P. 1x106 P. berghei MØ M2 MØ Altos níveis de Arginase IL-10, IFN-γ, IL-6, IL-12

19. Conclusão Terapias e vacinas + LES, Hb-S