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植物染色体标本的制备

细胞生物学实验五. 植物染色体标本的制备. 目的要求. 学习植物染色体标本的制备技术，了解 Feulgen 反应的基本原理 , 学习其操作方法和压片法 , 初步掌握细胞分裂各期的主要特点。. 实验原理. Feulgen 反应的原理是根据 DNA 经弱酸 (1mol/L) 水解后 , 打开嘌呤和脱氧核糖连接的键 , 在脱氧核糖的一端形成游离的醛基 . 这些醛基就在原位与 Schiff 试剂结合 , 形成含醌基的化合物 , 醌基是一个发色团所以具有颜色 , 因此凡有 DNA 的部位 , 就呈现紫红色。. 实验用品. 一、 材料 蚕豆、豌豆（或玉米、水稻）

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植物染色体标本的制备

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Presentation Transcript

  1. 细胞生物学实验五 植物染色体标本的制备

  2. 目的要求 学习植物染色体标本的制备技术，了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞分裂各期的主要特点。

  3. 实验原理 Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸(1mol/L)水解后,打开嘌呤和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基.这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成含醌基的化合物,醌基是一个发色团所以具有颜色,因此凡有DNA的部位,就呈现紫红色。

  4. 实验用品 一、 材料 蚕豆、豌豆（或玉米、水稻） 二、器材 显微镜，擦镜纸，剪子，镊子，小平皿，载玻片，盖玻片。 三、试剂 Carnoy固定剂， 95%酒精 ，1mol/L HCl, Schiff试剂，亚硫酸

  5. 实验方法 1、将植物种子放在潮湿的滤纸上，20℃使其发芽。 2、预处理：切取的0.5cm长的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理3～4小时。 3、固定、水解及染色： Carnoy固定剂固定10～30分钟→95%酒精10分钟→70%酒精10分钟→蒸馏水→ 1mol/L HCl, 60 ℃ 15分钟→ Schiff试剂40～60分钟 →亚硫酸水(1,2,3) →换3次,每次5分钟自来水→将染色后的根尖漂洗干净,选择染色效果好的材料→蒸馏水→压片→镜检

  6. 观 察 蚕豆根尖2n=2x=12

  7. 豌豆根尖 2n=2x=14

  8. 玉米根尖 2n=2x=20

  9. 水稻根尖 2n=2x=24

  10. 思考题 1、简述Feulgen反应的原理 2、欲得到一张好的Feulgen反应制片,制片过程中应注意些什么 3、绘制细胞分裂图。

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