1.22k likes | 4k Views
Column Chromatography. พุทธรักษา วรานุศุภากุล 2302244 เคมีวิเคราะห์ 2. Column Chromatography. เป็นเทคนิคทางโครมาโทกราฟีที่มีรูปแบบของการบรรจุเฟสคงที่ในท่อปิด เฟสคงที่และเฟสเคลื่อนที่ใน Column Chromatography เฟสคงที่ : บรรจุอยู่ในท่อหรือที่เรียกว่าคอลัมน์
E N D
Column Chromatography พุทธรักษา วรานุศุภากุล 2302244 เคมีวิเคราะห์ 2
Column Chromatography • เป็นเทคนิคทางโครมาโทกราฟีที่มีรูปแบบของการบรรจุเฟสคงที่ในท่อปิด • เฟสคงที่และเฟสเคลื่อนที่ใน Column Chromatography • เฟสคงที่: บรรจุอยู่ในท่อหรือที่เรียกว่าคอลัมน์ • เฟสเคลื่อนที่: ไหลผ่านเฟสคงที่ในคอลัมน์ด้วยแรงดันหรือแรงโน้มถ่วง (gravity) • เทคนิคทาง Column Chromatography • Gas Chromatography (GC): ใช้แก๊สเป็นเฟสเคลื่อนที่ • Liquid Chromatography (LC): ใช้ของเหลวเป็นเฟสเคลื่อนที่ เฟสคงที่ column
Gas Chromatography (GC) • ในเทคนิคนี้สารที่ต้องการแยกจะถูกเปลี่ยนให้อยู่ในสถานะแก๊ส แล้วผ่านเข้าคอลัมน์เพื่อเกิดการแยกโดยอาศัยการพาไปของเฟสเคลื่อนที่ที่เป็นแก๊ส • แก๊สที่เป็นเฟสเคลื่อนที่จะเป็นแก๊สเฉื่อยและไม่ทำปฏิกิริยากับสาร ทำหน้าที่เป็นตัวพาสารให้ผ่านคอลัมน์ไปอย่างเดียว ดังนั้น ในเทคนิค Gas Chromatography จึงนิยมเรียกแก๊สที่เป็นเฟสเคลื่อนที่นี้ว่าแก๊สพา (carrier gas) • แก๊สโครมาโทกราฟีแบ่งออกได้เป็น 2 วิธี คือ • Gas-liquid chromatography (GLC) • การกระจายตัว (partitioning) ของสารระหว่างแก๊สพากับเฟสคงที่ของเหลวที่เคลือบอยู่บนผิวของ solid support หรือที่ผนังของแคพพิลลารีคอลัมน์ • Gas-solid chromatography (GSC) • เฟสคงที่เป็นของแข็งที่สามารถดูดซับ (physical adsorption) สารที่เป็นแก๊สซึ่งต้องการแยกได้ เช่น molecular sieves, silica gel, alumina, activated carbon เป็นต้น
องค์ประกอบของเครื่อง GC Injector Detector Carrier gas Recorder and Data processing Column
องค์ประกอบของเครื่อง GC เครื่องโครมาโทกราฟ (GC) ประกอบด้วยส่วนหลักๆ 5 ส่วน คือ • แก๊สพา (carrier gas) - มีถังบรรจุแก๊สพาและส่วนควบคุมการไหลของแก๊ส • ส่วนฉีดสารตัวอย่าง (injector) - ส่วนที่นำสารเข้าสู่คอลัมน์เพื่อทำการแยก • คอลัมน์ (column) - วางอยู่ในตู้อบ (oven) ที่สามารถปรับอุณหภูมิได้รวดเร็ว • ส่วนการตรวจวัด (detector) - ทำการตรวจวัดสารแต่ละชนิดที่ถูกแยกออกมา • ส่วนการประมวลผล (recorder and data processing)
Two-stage gas regulator แก๊สพา (Carrier Gas) • แก๊สที่ใช้เป็นแก๊สพาจะต้องไม่ว่องไวต่อการทำปฏิกิริยา (chemically inert) • แก๊สที่นิยมใช้ ได้แก่ He, N2, H2, และ Air • การปรับอัตราเร็วของแก๊สพา ทำโดยปรับความดันของแก๊สซึ่งควบคุมด้วย pressure regulator • Inlet pressure: 10-50 psi (above room pressure) • อัตราเร็วของแก๊ส (volumetric flow) ที่ใช้ในเทคนิค GC • สำหรับ packed column: 25-150 mL/min • สำหรับ capillary column: 1-25 mL/min Bubble flow meter
ชนิดของแก๊สพา (carrier gas) • เมื่อทำการเปลี่ยนความเร็วหรืออัตราเร็วของแก๊สพาที่ผ่านคอลัมน์ ผลกระทบต่อประสิทธิภาพคอลัมน์ในการใช้แก๊สพาแต่ละชนิดจะไม่เท่ากัน • ไนโตรเจนเป็นแก๊สพาที่ให้ค่า H ต่ำสุด (ได้ประสิทธิภาพคอลัมน์มากที่สุด) แต่ทำได้ที่ความเร็วของแก๊สพาต่ำๆ อีกทั้งช่วงของค่าความเร็วแก๊สที่ทำให้ได้ประสิทธิภาพในการแยกที่ดีแคบ • ไฮโดรเจนและฮีเลียมให้ค่า Hoptที่ความเร็วของแก๊สที่สูง ทำให้ทำการแยกสารได้เร็วขึ้น
ความบริสุทธิ์ของแก๊ส • Carrier gas should contain less than 1ppm of oxygen, moisture, or other trace contaminants • Carrier gas impurities can also contribute to detector noise • Gas grade/Trap • Longer column lifetime • Less GC maintenance
เกรดของแก๊ส • Research grade • 99.9999% total purity • Total impurities < 1ppm • Complete analysis of all contaminants • Ultra-Pure Carrier grade • 99.9995% total purity • total hydrocarbon < 0.5ppm • H2O, O2 each < 1ppm • UHP/Zero grade • 99.999% total purity • total hydrocarbon < 0.5ppm • H2O < 3.5ppm, O2 < 4ppm Trace analysis < 1 ppm 1-1000 ppm > 1%
Gas Purity A. Molecular Sieve TrapB. Hydrocarbon TrapC. Oxygen Trap
Traps Hydrocarbon Trap Molecular Sieve Trap (moisture trap) Oxygen Trap
Sample Injection System • Introduced as a plug of vapor with suitable size • Slow injection or oversized samples cause band spreading and poor resolution • Microsyringes • Injection ports
Injection port • 50º C greater than boiling point of the least volatile component • Sample size: L • Split mode (1:100) • Split/splitless mode • Autosampler Septum Carrier gas Septum purge Heated injection port Vent Inlet liner Column
Vaporization Injectors • Basic design • a glass liner resides inside the heated, metal injector body • Sample introduction • rapidly vaporizes as of high temperature • carried by the movement of carrier gas into the column
Microsyringes/ Autosampler Gas-tight syringe Autosampler Microsyringe
Packed vs Capillary • Length: 2-50 m or more • Stainless steel, glass, fused silica, or Teflon Open-tubular Column (capillary column) Packed Column
Packed Column • Glass or metals • 2-3 m long, 2-4 mm i.d. • Densely packed with packing materials or solid support coated with thin layer of stationary liquid phase • Diatomaceous earth • Size: 60-80 mesh (250-170 m) or 80-100 mesh (170-149 m)
Open Tubular Column • Better resolution – efficient mass transfer between gas and SP • Tubing – fused silica, glass, copper, stainless steel
Types of Open Tubular Column Solid support coated with liquid phase Porous Adsorbent Liquid phase Wall-coated Open Tubular (WCOT) Support-coated Open Tubular (SCOT) Porous Layer Open Tubular (PLOT) FSOT: Fused-silica open tubular column
Characteristics *Megabore column
Stationary Phases • Low volatility, thermal stability, chemical inertness • Provide k and within a suitable range • consider the polar characteristics of the analytes and select SP of similar polarity ‘Like dissolves like’
Stationary Phases • Solid phase • Most uses for separation of low MW compounds and gases • Common SP: silica, alumina, molecular sieves such as zeolites, cabosieves, carbon blacks • Liquid phase • Over 300 different phases are widely available • grouped liquid phases • Non-polar, polar, intermediate and special phases • Polymer liquid phase
Stationary Phase Polymers • Siloxane • Arylene • Polyethylene glycol
Liquid phases • Non-polar phase • Primarily separated according to their volatilities • Elution order varies as the boiling points of analytes • Common phases: dimethylpolysiloxane, dimethylphenylpolysiloxane • Polar phase • Contain polar functional groups • Separation based on their volatilities and polar-polar interaction • Common phases: polyethyleneglycol • Intermediate phase
Bonded and Cross-linked SP • Bonded and cross-linked SP provides long term stability, better reproducibility and performance. Polymer chains Cross-linking Bonding Fused silica tubing surface
Column Dimensions • Column Length: 10 – 60 m • Column Internal Diameter: 0.10 – 0.53 mm • Stationary Phase Film Thickness: 0.10 – 0.25 mm
Purpose of Detector - Monitor the carrier gas as it emerges from the column - Generate a signal in response to variation in its composition due to eluted components.
Ideal Detector • Adequate sensitivity 10-8 – 10-15 g solute/s • Good stability and reproducibility • Linear response to analytes • Temperature range from room temperature to at least 400oC • Short response time • High reliability and ease of use • Similarity in response • Nondestructive of sample • Low background noise and ease of operation
Classification of Detectors • Concentration vs. Mass flow rate • Selective vs. Universal • Destructive vs. Nondestructive
Concentration vs. Mass Flow • Concentration-dependent detectors: TCD, ECD • normally non-destructive • can be used in series • make-up gas lower the response • Mass flow dependent detectors: FID, NPD, FPD • signal related to rate of solute molecules enter the detector • destructive • unaffected by make-up gas
Selective vs. Universal • Universal detectors: TCD • Detecting all solutes • Beneficial for qualitative screening • Selective detectors: ECD,NPD,FPD • Responds to particular types of compounds • common chemical or physical property • Enhances sensitivity for trace analysis
Flame Ionization Detector (FID) • Selectivity: • Compounds with C-H bonds • A poor response for some non-hydrogen containing organics (e.g. hexachlorobenzene) • Fewer ions or none in flame • carbonyl, alcohol, halogen, and amine • Insensitive toward noncombustible gases such as H2O, CO2, SO2 and NOx
Mass Spectrometer Detector (MSD) MS with EI ion source, a quadrupole mass analyzer and a continuous-dynode electron multiplier.
Liquid Chromatography Partition liquid chromatography Adsorption liquid chromatography Ion or Ion exchange chromatography Size exclusion chromatography Affinity chromatography Chiral chromatography
Liquid Chromatography (LC) • สารที่ต้องการแยกผ่านเข้าคอลัมน์เพื่อเกิดการแยกโดยอาศัยการพาไปของเฟสเคลื่อนที่ที่เป็นของเหลว • Liquid Chromatography ที่ใช้ในการวิเคราะห์ในปัจจุบัน มีดังนี้ • Classical LC หรือ Column LC • ใช้อนุภาคที่มีขนาดใหญ่ (โดยทั่วไปประมาณ 100-250 mm) บรรจุในคอลัมน์ที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 1-5 เซนติเมตร • High Performance Liquid Chromatography (HPLC) • ใช้อนุภาคที่มีขนาดเล็ก (โดยทั่วไปประมาณ 5-50 mm) บรรจุในคอลัมน์ที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 1-5 มิลลิเมตร • ใช้ high pressure pump ในการช่วยให้เฟสเคลื่อนที่ไหลผ่านคอลัมน์
Liquid Chromatography (LC) เทคนิค HPLC นิยมจำแนกตามกลไกการแยก ซึ่งมีดังนี้ • Partition liquid chromatography Based on a partitioning of solutes between mobile phase and stationary phase (solute diffuses into the interior of stationary phase) • Adsorption liquid chromatography Based on an adsorption of solutes onto the surface of solid stationary phase which is called adsorbent. • Ion or Ion exchange chromatography Based on an exchange between solute ions in mobile phase and ions of like charge associated with the stationary phase surface • Size exclusion chromatography Based on a physical sieving process • Affinity chromatography Based on specificity of analyte-stationary phase interactions • Chiral chromatography Based on a chiral selector
Partition chromatography • Bonded phase packing: organosilane • Normal phase • Highly polar SP, relatively non-polar MP • Least polar component is eluted first; increasing polarity of MP decreases elution time • Reversed phase • Non-polar SP, relative polar MP • Most polar component eluted first; increasing polarity of MP increases elution time