1 / 26

Wet Lab

Wet Lab. Смирнов Арсений Пензенцева Евгения. ДНК (4 нуклеотида: А, Т, G, C ). Выделение ДНК. Выделение ДНК. Оценка качества и количества ДНК. Электрофорез Спектрофотометрия Флуорометрия. спектрофотометрия. элетрофорез. С[µ g/ml] = А 260 x K K ( dsDNA ) = 50 K ( ssDNA ) = 37

paley
Download Presentation

Wet Lab

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Wet Lab Смирнов Арсений Пензенцева Евгения

  2. ДНК(4 нуклеотида: А, Т, G, C)

  3. Выделение ДНК

  4. Выделение ДНК

  5. Оценка качества и количества ДНК • Электрофорез • Спектрофотометрия • Флуорометрия спектрофотометрия элетрофорез С[µg/ml] = А260x K K (dsDNA) = 50 K (ssDNA) = 37 K (ssRNA) = 40 А260/А280 = 1,8-1,9 – чистая ДНК

  6. Электрофорез

  7. Плазмиды • Состав вектора: • Ориджин репликации • Селективный маркёр • Полилинкер

  8. pBluescriptII SK (+)

  9. Севенирование ДНК- прочтение последовательности Классические методы: • Максам-Гилберт (химическое) • Сэнгер (энзиматическое)

  10. Секвенирование (Сэнгер)

  11. Автоматическое секвенирование

  12. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – метод, позволяющий избирательно синтезировать большие количества определённых фрагментов ДНК • «Полимеразная» - используется фермент ДНК-полимераза • «Цепная» - состоит из повторяющихся циклов, количество ДНК с каждым циклом увеличивается в геометрической прогрессии 1983 г, КэриМуллис

  13. Компоненты ПЦР Буфер

  14. Суть ПЦР

  15. Этапы ПЦР

  16. Амплификаторы • Термостатирование: • твёрдый термоблок (элемент Пельтье) • жидкость • поток воздуха

  17. ПЦР в реальном времени(Real-time PCR) • одновременная амплификация и измерение количества продукта • наличие флюоресцентного красителя в смеси • наличие оптического блока в амплификаторе линейный lg

  18. Системы детекции • Неспецифичные • интеркалирующие красители (SYBR Green и др.) • Специфичные • линейные разрушаемые пробы (TaqMan) • «молекулярные маячки» (beacons) • примыкающие пробы

  19. Линейные разрушаемые пробы(TaqMan = Taq-polymerase + Pac-Man)

  20. Фармакогенетика препаратов для лечения тромбозов Непрямые антикоагулянты: варфарин аценокумарол фенпрокумон кумарин

  21. Заболевания, при которых назначают непрямые антикоагулянты: • Венозные тромбозы • Легочная тромбоэмболия • Тромбоэмболические осложнения, связанные с мерцательной аритмией и трансплантацией сердечных клапанов • Инфаркт миокарда: снижение риска смерти, повторного инфаркта миокарда и случаев тромбоэмболических осложнений

  22. Нежелательные лекарственные реакции (НЛР) – кровотечения. МНО (международное нормализованное отношение). При применении варфарина частота кровотечений достигает 25%. • Факторы риска кровотечений при применении непрямых антикоагулянтов: • Сопутствующие заболевания • Применение других препаратов • Нарушение дозировки • Индивидуальная чувствительность Непрямые антикоагулянты – антагонисты витамина К1

  23. Метаболизм витамина К1 (factor II, VII, IX, X, protein C, S, Z)

  24. Полиморфизм гена CYP2C9 CGT 430 Exon 3 Exon 7 Arg Аллельные варианты гена: • CYP2C9*1 – нормальная каталитическая активность • CYP2C9*2 (Arg144Cys) - пониженнаякаталитическая активность • CYP2C9*3 (Ile359Leu) – выраженная пониженнаякаталитическая активность 1075 ATT Ile TGT 1075 ATT 430 Exon 3 Exon 7 Cys Ile CGT 1075 CTT 430 Exon 3 Exon 7 Arg Leu

  25. Снижение дозы варфарина в зависимости от генотипа CYP2C9(Lindh et al.,2009) Частоты аллелей в европейской популяции: CYP2C9*2 – 10%, CYP2C9*3 – 6%

More Related