401 likes | 617 Views
Walter Gilbert (1932). Marcaje radiactivo y separación de las hebras del ADN. C only: Hydrazine in 1.5 M NaCl, piperidine. C+T: Hydrazine, piperidine. G only: DMS, piperidine. A + G: DMS, formic acid, piperidine. Rompe el ADN mediante 4 reacciones químicas específicas.
E N D
C only: Hydrazine in 1.5 M NaCl, piperidine C+T: Hydrazine, piperidine G only: DMS, piperidine A + G: DMS, formic acid, piperidine Rompe el ADN mediante 4 reacciones químicas específicas
+ Kary B. Mullis (1944) Frederick Sanger (1918) Secuenciación cíclica del ADN = Sanger + PCR
TdTAMRA (600 nm) AdR6G (570 nm) GdROX (620 nm) CdR110 (540 nm) 4 ddNTPs fluorescentes distintos
C R-110 A R6G T TAMRA G ROX Cada ddNTP emite una fluorescencia de distinto color
template Se puede hacer la reacción en un solo tubo, no en 4
Electroferograma La electroforesis capilar es mucho más rápida
Electroferograma Cada electroferograma secuencia entre 400 y 900 bases
Pirograma Reconstrucción de la secuencia (hasta 700 pb)
James Watson (1928) Pirosecuenciación de un genoma completo