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硕 士 研 究 生 开题报告

硕 士 研 究 生 开题报告. 乳腺癌 HER-2 的表达与耐药相关机制的研究. 广东医学院病理教研室 研究生：龚晓萌 导师：姜汉国 副教授. 主要内容. 立题依据 研究内容 技术路线 预期结果 研究进度及实验安排 经费预算. 立题依据. 乳腺癌的现状和耐药性的问题 HER-2 的结构与功能 HER-2 的表达与乳腺癌及耐药的关系 PI3K 的信号传导途径. 乳腺癌的现状. 近 20 年来， 乳腺癌已经成为严重威胁妇女健康的主要疾病 全球每年发病患者超过 100 万. 耐药性的问题. 乳腺癌的治疗主要手段是手术、放疗、 化疗以及内分泌治疗

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Presentation Transcript

  1. 硕 士 研 究 生 开题报告

  2. 乳腺癌HER-2的表达与耐药相关机制的研究 广东医学院病理教研室 研究生：龚晓萌 导师：姜汉国 副教授

  3. 主要内容 • 立题依据 • 研究内容 • 技术路线 • 预期结果 • 研究进度及实验安排 • 经费预算

  4. 立题依据 • 乳腺癌的现状和耐药性的问题 • HER-2的结构与功能 • HER-2的表达与乳腺癌及耐药的关系 • PI3K的信号传导途径

  5. 乳腺癌的现状 • 近20年来，乳腺癌已经成为严重威胁妇女健康的主要疾病 • 全球每年发病患者超过100万

  6. 耐药性的问题 • 乳腺癌的治疗主要手段是手术、放疗、 化疗以及内分泌治疗 • 乳腺癌是对化疗敏感的实体瘤之一,术后辅助化疗可以减少复发率 • 内在性和获得性的耐药常使化疗失败

  7. 多药耐药 • 多药耐药的概念 • 多药耐药指肿瘤细胞接触了一种药物之后，不但对该药耐药，而且对其他结构和作用机制不同的药物耐药 • 多药耐药的主要机制 • 1、转运蛋白的过表达 2、细胞信号转导通路的异常改变3、抗凋亡机制的参与

  8. HER-2的结构与功能 • HER-2原癌基因产物是EGFR家族中的重要成员 • HER-2受体由胞内区、胞外区、亲脂性的跨膜区和一段调节性羧基末端组成。 • HER-2受体具有酪氨酸激酶活性

  9. HER-2的表达与乳腺癌的关系 • HER-2的过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、激素受体状态密切相关 • HER-2过表达的乳腺癌进展迅速，易转移和复发

  10. HER-2与耐药的关系 • 乳腺癌的化疗药物大致包括烷化剂、蒽环剂、紫杉剂。紫杉剂是目前应用于临床的一线化疗药物 • 约50%-70%的肿瘤细胞对紫杉醇存在耐药 • 在乳腺癌，HER-2的扩增被证实和紫杉醇的耐药有关

  11. YU D等的研究表明，HER-2基因高表达的乳腺癌细胞对Taxol、DDP等化疗药物，全反式维甲酸以及内分泌治疗药物具有很强的耐药性 • 但是Konecny G等得到了相反的结果，HER-2基因高表达者反而对化疗敏感

  12. PI3K-AKT信号传导途径

  13. 其他方面的证据

  14. 郝赛汀（Herceptin）是一种靶向HER-2受体胞外段的单克隆抗体郝赛汀（Herceptin）是一种靶向HER-2受体胞外段的单克隆抗体 • 将郝赛汀应用于阻断生长刺激细胞内信号转导能够降低放、化疗后的细胞修复能力，还可能增加细胞凋亡。 • Witters等研究均采用针对HER-2的细胞外区域的抗体处理HER-2的过表达乳腺癌细胞，使这种细胞对三苯氧胺（TAM）及纯雌激素拮抗剂的敏感性增加

  15. 思考 1、乳腺癌的耐药是否和细胞的凋亡有关系？ 2、乳腺癌的耐药是否和HER-2的过表达有关系？ 2、乳腺癌的耐药是否和PI3K-AKT途径有关系？

  16. 可以假设：HER-2通过PI3K-AKT-Bcl-2途径引起细胞的凋亡减少，从而引起细胞耐药性的产生。可以假设：HER-2通过PI3K-AKT-Bcl-2途径引起细胞的凋亡减少，从而引起细胞耐药性的产生。

  17. 研究内容 资料分组 ◆临床资料分组：分为乳腺癌、癌旁组织两组，每组各30例 ◆乳腺癌细胞系：分为MCF-7和MCF-7/ADR两组

  18. 临床部分

  19. 用免疫组化的方法检测乳腺癌及癌旁组织HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的蛋白表达水平用免疫组化的方法检测乳腺癌及癌旁组织HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的蛋白表达水平

  20. 体外实验

  21. 用免疫细胞化学的方法分别检测两种细胞株中的HER-2、PI3K、AKT的蛋白表达水平及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。用免疫细胞化学的方法分别检测两种细胞株中的HER-2、PI3K、AKT的蛋白表达水平及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。 • 用Western-blot方法分别检测两种细胞株中的HER-2以及Bcl-2的蛋白表达水平以及PI3K、AKT的磷酸化的蛋白的水平。 • 用RT-PCR方法分别检测两种细胞株中的HER-2、PI3K、AKT、Bcl-2的mRNA水平。 • 流式细胞仪检测两种细胞株的凋亡指数。

  22. 技术路线图如下：

  23. 临床标本实验 乳腺癌组织 癌旁组织 检测 PI3K、AKT的表达 检测 HER-2的 表达 检测Bcl-2的表达 综合分析其三者相关性

  24. 体外实验部分 MCF-7乳腺癌细胞株 MCF-7/ADR乳腺癌细胞株 流式细胞仪 检测细胞的 凋亡指数 免疫组化检测HER-2、PI3K、AKT的蛋白含量及Bcl-2的蛋白水平 Western检测HER-2、Bcl-2 以及磷酸化的PI3K、AKT及的蛋白水平 RT-PCR检测HER-2、PI3K、AKT及Bcl-2 的mRNA水平 综合分析结果

  25. 检测方法 • 用免疫组化的方法定性检测HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的蛋白含量 • 用Western-blot的方法检测HER-2、Bcl-2以及磷酸化的PI3K、AKT的蛋白含量

  26. RT-PCR的方法检测HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的mRNA水平RT-PCR的方法检测HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的mRNA水平 用流式细胞仪检测细胞凋亡指数

  27. 预期结果

  28. 临床标本实验 • 临床标本中，HER-2、PI3K、AKT、Bcl-2在乳腺癌中高表达 • 临床标本中，HER-2、PI3K、AKT、Bcl-2在乳腺癌中表达具有相关性

  29. 细胞实验 • 流式细胞仪检测MCF-7/ADR细胞的凋亡比MCF-7的凋亡少 • 免疫细胞化学的方法检测HER-2、Bcl-2、PI3K以及AKT的蛋白表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高 • Western-blot的方法检测HER-2、Bcl-2以及磷酸化的PI3K以及AKT的蛋白表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高 • RT-PCR方法检测HER-2、Bcl-2、PI3K以及AKT的mRNA表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高

  30. 研究进度及实验安排 • 2004. 11-2005.2 完成临床标本的收集 • 2005. 3-2005.5 完成临床标本的检测 • 2005. 6-2006.2 完成细胞的复苏培养及细 胞的各项指标的检测 • 2006. 3-2006.4 撰写论文、准备答辩

  31. 经费预算 ◆Western blot： 5000元 ◆免疫组化： 3000元 ◆细胞培养： 2000元 ◆RT-PCR： 4000元 ◆其它： 1500元 总计：15500元

  32. 敬请各位老师批评指正 谢谢

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