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CITOQUININAS. HISTORIA. 1892 Weisner (Observaciones y Teorías) Sugiere existencia de compuesto que regula la división celular. 1913 /1921 Haberlandt Extracto de floema induce división celular en parénquima de tubérculos de papa y heridas Si herida es lavada con agua, no se forma callo
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HISTORIA 1892 Weisner (Observaciones y Teorías) • Sugiere existencia de compuesto que regula la división celular. 1913/1921 Haberlandt • Extracto de floema induce división celular en parénquima de tubérculos de papa y heridas • Si herida es lavada con agua, no se forma callo • XLT: compuesto soluble • Define término: totipotencia 1950 Skoog (U. Wisconsin) Estudiaba brotación de novo en tallos de tabaco cultivados in vitro Respuesta muy variable > in vitro shoots en medio de cultivo Prueba agua de coco – Steward at Cornell investiga componentes- que no interfiera Skoog 1500 m en Suecia 1932 contactó depto de Bioq. 1952 reportan fracción de agua de coco 4.000 x mas activa, estable a temp, no volatil, orgánico 1951 Carlos Miller Beca en grupo de Skoog. Busca en extracto de levadura actividad promotora de brotación. Encontró cultivo (botella) con alta actividad promotora en tallos de tabaco, no las otras, Observó que actividad precipitaba con AgNO3, igual q purinas y pirimidinas y probó estas individualmente pero no hubo resp. pero la duda persistió x reporte de skoog de auxinas + adenina promovían división. Probó diferentes fuentes de ADN entre ella Herring Sperm (arenque) y tenía alta actividad y precipitaba con AgNO3!
Se compró HS pero no teníaactividad. Cuando HS se puso “viejo” empezó a mostraractivdad. Probósiautoclavandofavorecía el envejecimiento y asífue. El compuesto se logrópurificar • 1955 Miller et al • Describenactividad en artículo. Y proponenue se denominekinetina. • El grupo de Steward encontró en coco a difenilurea
Historia cont. 1957 Skoog y Miller • Proponen teoría del crecimiento y desarrollo: este es controlado por la relación de auxina y citoquininas (kinetina). Callos de tabaco. 1956 Skoog y Liberman • Observan que kinetina aumenta el tamaño de las hojas 1958 Wickson y Thimann • Observan que kinetina rompe dominancia apical en Pisum sativum y rompe letargo de semillas de lechuga, tabaco, trévol otros. 1962 Oberbeek and Loeffler • Kinetina alarga vida de vegetales al reducir tasa de descomposición de proteínas 1963 Letham Australiay Miller en US primeros en aislar citoquinina de plantas, ambos en granos de maíz. ZEATINA
Definición • Sustancia que en presencia de una concentración óptima de auxina, induce división celular en cultivos in vitro de médula de tabaco
Bioensayos • Inducción de división en células de médula de tabaco • Inducción de división en células de callo soya • Expansión de células de cotiledones de rábano • Inhibición de la senescencia medido por reducción de degradación de la clorofila.
Citoquininas naturales • Adenina • Zeatina (trans y cis) • Dihidro-zeatina • Dimetilalil adenina (DMAA) • Isopentenil adenina
Citoquininas Naturales
Citoquinas sintéticas • Kinetina • Benzyl-adenina • Tetrahydropyranyl-benzyl-adenina
Factores de Sensibilidad RECEPTIVIDAD cambio en número de receptores AFINIDAD cambio en receptores por modificaciones covalentes o cambios alostéricos causados por unión de una molécula al receptor CAPACIDAD DE RESPUESTA cambios en la cadena de eventos posteriores a la unión del RC al receptor EFICIENCIA DE ABSORCION cambios en el sistema de absorción de RC METABOLISMO degradación endógena
Sitios de síntesis • Raíces • Meristemos de raíz y tallo • Cambium • Tejidos de almacenamiento (conjugados) • Tejidos en crecimiento • Semillas • Frutos • Raíces • Yemas laterales • Endospermo líquido
Síntesis a partir de tRNA • En tRNA predomina isómero cis y en la planta predomina trans • En callos de tabaco que no necesitan ck para crecer la tasa de degradación de tRNA-z no es suficiente para mantener el nivel de ck libre observado
Conjugación • Combinación reversible de citoquininas con diferentes compuestos y se usan en momentos específicos • Se almacenan en vacuolas y/o ret. endopl. • Compuestos son transportables • Tipo de conjugación depende de especie y de etapa del desarrollo • Se puede combinar con: Glucosa, ribonucleósidos y ribonucleótidos
Conjugación Intermediarios en síntesis?
Catabolismo • Remoción irreversible de citoquininas • Vía Citoquinina oxidasa + Isopentenil adenina adenina 3 metyl-2-butenal Citoquinina oxidasa
ZEATINA UREA
Transporte • Ribonucleótido de zeatina • Forma más común de transporte • Bidireccional
Precursores de citoquinina Conjugadosinactivos Citoquininasactivas Zeatina, ribosido de Z Isopentenyladenina Isopentenyladenosina 7 y 9 N-glucósidos AMP Isopentenylpirofosfato O-glucósidos B-glucosidasa Ck oxidasa MetabolitosInactivos Adenina y derivados de adenina Homeostasis Auxina Auxina Conjug. de Auxina
Efectos Fisiológicos • En combinación con auxinas regulan la relación parte aérea:raiz • Regula dominancia apical • Activa crecimiento de yemas laterales • Induce división celular • Induce formación de órganos in vitro • Retarda senescencia de hojas • En combinación con etileno y luz regula el crecimiento de dicots en la oscuridad
Auxina Auxinas Citoquininas Sacarosa Señales específicas Regulación metabólica División Celular Agostino y Kiever, 1999
División celular y giberelinas • mRNA de cdc activada por Giberelinas • mRNA de ciclina • Síntesis de DNA • Acumulación de células en G2 • Alista células para entrar a M
Citoquininas y morfogénesis A. Reyes
Otros efectos fisiológicos • Estimula pérdida de agua por transpiración • Elimina dormancia en algunas semillas • Estimula formación de tubérculos
Genética Molecular Respuesta molecular asociada al crecimiento • Receptor • Transducción • Respuesta Rápida • Bomba de protones • Secreción • Respuesta Lenta • Activación de proteínas reguldoras • Síntesis de mRNA • Síntesis de proteínas de crecimiento
Sistema de dos componentes Kakimoto, 2003
Tipo B: activador de TC no influenciado por ck Tipo A: represor de TC, influenciado por ck Type A no fosforilado inhibe la TC inducida por Tipo B, su fosforilación permite TC de Tipo B. Tipo B sintetiza Tipo A (autoregulación) ARR: arabidopsis response regulator Kakimoto, 2003
Fig. 1. Model for the cytokinin multistep two-component circuitry through histidine (H), and aspartate (D) phosphorelay, involving histidine-kinase receptors (HK), phosphotransfer proteins (HPT), a “pseudo–HPT” with an asparagine (N) instead of the D, and A-type and B-type RRs. Each signaling step is executed by a family of genes that largely act redundantly, as illustrated. B Müller, J Sheen Science 2007;318:68-69