单克隆抗体

1. 单克隆抗体 第三小组成员：吴聪聪、吕林、包银伟、高迪、沈扬、王泽成

2. contents 1. 简要概况 2. 具体制备过程 3. 应用进展 1

3. 简要概况 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在细胞杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术。 定义：高度均质性的特异性抗体，由一个识别单一抗原表位的B细胞克隆所分泌。一般来自杂交瘤细胞。 返回 1

4. 单克隆抗体制备原理 1

5. 单克隆抗体制备基本流程 抗原 动物免疫 B细胞 融合 骨髓瘤细胞系 小鼠腹腔接种 杂交瘤 筛选 收集腹水提取抗体 细胞培养,大量制备抗体 1

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7. 细胞融合 融合剂： 病毒（病毒神经氨酸酶降解细胞膜上的糖蛋白） 聚乙二醇（PEG，融合率较仙台病毒高数百倍） 电融合技术 PEG 的作用机制： PEG 可以使细胞聚积在一起,当PEG 的浓度达50%时,PEG 可能与邻近膜的水分相结合,使细胞之间只有几个埃的空间的水分被取代,由此,降低细胞表面的极性,导致脂双层不稳定,引起细胞膜的融合. 图解 1

8. 细胞融合的方法有：1 化学融合法，聚乙二醇（PEG）融合法。 2 物理法，如电融合、激光融合。 3 生物融合法，如用仙台病毒。 融合过程中常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等，3:1或5:1最为常用。 1

9. 细胞融合的关键 ： 1．技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。 ２．融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。 1

10. 杂交瘤细胞 克隆化的细胞可以在体外进行大量培养， 收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。 不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不 能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。 而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。 杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。 1

11. 单克隆抗体杂交瘤技术基本流程 1

12. 杂交瘤技术的优缺点 优点： 1）几乎能获得引起小鼠免疫反应的任何抗原或抗体 2）有利于特异性杂交瘤的富集 3）可长期传代并保存 4）抗体结构高度均一，具有高度特异性 5）有利于杂交瘤细胞保持亲本细胞的抗体分泌优势 6）可由未纯化抗原制备纯质抗体 7）该技术使抗体成为一种可以按需制备并且灵活运用的试剂 8）合成抗体易于用同位素标记 9）使一个正常细胞的功能得以“永存” 1

13. 缺点： 1）融合率低 2）一些杂交瘤细胞在抗体分泌上显得不稳定 3）尚需要建立范围更广泛、符合各种细胞融合 要求的骨髓瘤细胞系。 1

14. 克隆化与再克隆化 克隆：由单个细胞繁殖扩增而形成性状均一的细胞集落的过程。 目的：确保杂交瘤细胞所分泌的抗体具有单克隆性以及从细胞 群中筛选出具有稳定表现型。 方法：1有限稀释法 2显微操作法 3软琼脂平板法 4荧光激活分离法 1

15. 单克隆抗体的优点： ① 单一特异性，与一个抗原决定簇反应； ②可重复性，能够提供完全一样的抗体制剂； ③一经制出，可大量地供应； ④生产单克隆抗体，不一定需要纯的抗原； ⑤灵敏性高，能查出混合物中存在的用常规方法查不出的 少量成分。 1

16. 比较项目 多克隆抗体（PcAb） 单克隆抗体（MAb） 免疫原要求 免疫原纯度高，抗体 纯度才能高 不纯的免疫原可以获得高纯度抗体 抗体产生细胞 多克隆性 单克隆性 均质性 高度异质 高度纯质 特异性 较高，与抗原上多种决 定簇结合 高，与抗原上特定决定簇结合 稳定性 较好 相对较差，对理化条件敏感 标准化 较难，不同批次的抗体质 量差异大 易于标准化，批次间差异小 交叉反应 很常见，难避免非特异性 反应 不常见，可避免非特异反应 沉淀反应 有 多数没有 实用的血清学试验 大多数血清学试验 一种或多种，需适当选择 供应量 有限 无限 有效抗体含量 0.1-0.2 mg/ml 小鼠腹水2.0-30 mg/ml 无效Ig含量 10.0-15.0 mg/ml 体外培养一般没有，小鼠腹水0.5-5.0 mg/ml 其它血清蛋白 存在 体外培养可能有少量小牛血清蛋白，小鼠腹水有少量杂蛋白 1 返回

17. 单克隆抗体应用 1、单克隆抗体靶向制剂 1）药物与单抗直接偶联 2）药物通过小分子与单抗连接 3）药物通过大分子与单抗相连 2、肿瘤的导向治疗 1

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19. 单克隆抗体与新型诊断技术 体内微量成分和药物的测定 癌症诊断 传染病诊断 蛇毒诊断 体内定位诊断 放射免疫显影技术：是对肿瘤及其转移灶或复发灶进 行定位或定性诊断的无创伤新技术 1

20. 谢谢