质量检验的基本程序与方法 朱伊娜 药学 1 班

1. 质量检验的基本程序与方法朱伊娜 药学1班 • 包括以下项目： 来源与种类、性状、鉴别、氨基酸组分分析、肽图、糖含量、纯度、干燥失重或水分、炽灼残渣、生物活性、热原试验和含量分析等。

2. 主要介绍如下： • 鉴别试验 需用标准品或对照品在同一条 件下进行对照试验 • 杂质检查 • 安全性检查 • 含量（效价）测定

3. 理化鉴别法 1、化学鉴别法 呈色反应、沉淀反应 2、紫外分光光度法 共轭系统 3、高效液相色谱法 保留时间和肽图谱 • 生化鉴别法 1、酶法 2、电泳法 3、样品脱盐后用等电点聚焦法测定 • 生物鉴别法 返回

4. 举例 • 溶菌酶的鉴别采用呈色法，溶菌酶分子中的四个肽键上的氮原子能与酮离子(Cu2+)络合，生成有颜色的配位化合物，肽键越多，产生的颜色越深。 • 胃蛋白酶是具有高效、专一催化活性的特殊蛋白质，易受酸、碱、重金属或有机溶剂的作用，破坏蛋白质肽链的空间结构，引起蛋白质变性，生成不溶性沉淀。 返回

5. 举例 • 三磷酸腺苷二钠的分子结构中具有共轭双键，可吸收紫外光产生特征吸收峰。 本品的0.01mol/L盐酸水溶液(20ug/ml)在257nm的波长外有最大吸收。A250nm／A260nm的比值应为0.17～0.27。 返回

6. 举例 重组人生长激素： • 供试品主峰的保留时间应与相应的对照品的保留时间一致; • 肽图谱供试品与对照品一致。 返回

7. 尿激酶能特异性激活牛纤维蛋白溶酶原而具有相同作用的链激酶不能，以此加以区别，并用直接观察溶解纤维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。尿激酶能特异性激活牛纤维蛋白溶酶原而具有相同作用的链激酶不能，以此加以区别，并用直接观察溶解纤维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。 返回

8. 肝素的糖凝胶电泳法鉴别，肝素是由D－硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间组成的酸性粘多糖，其水溶液带强负电荷，于琼脂凝胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，与肝素标准品进行对照，其移动位置应相应一致。肝素的糖凝胶电泳法鉴别，肝素是由D－硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间组成的酸性粘多糖，其水溶液带强负电荷，于琼脂凝胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，与肝素标准品进行对照，其移动位置应相应一致。 返回

9. 一般杂质检查： 氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。 • 特殊杂质检查： 1、原料药的纯度分析 （1）多糖类 （2）酶类药物 2、生产过程中杂质的检查 返回

10. 异性蛋白 豚鼠 • 热原检查法和细菌内毒素检查法 • 异常毒性试验 • 过敏试验　　　　 • 降压物质试验 • 无菌试验 • 基因工程药物中可能杂质与污染物检查 • 致突变试验 • 生殖毒性试验 返回

11. 异常毒性试验 急性毒性反应 限度试验 实验动物：小鼠 反应的判断以试验动物死亡与否为终点。 返回

12. 导致血压降低的杂质： 组胺、类组胺或其它导致血压降低的物质 • 来源： 正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胺类物质。 • 实验动物：猫（或狗）血压法 返回

13. 基因工程 • 杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白质突变体、蛋白质裂解物等。 • 污染物：微生物、热原、病毒。 • 检查项目： 外源性DNA、宿主细胞蛋白质、其它有关杂质和细菌内毒素 返回

14. 致突变试验 • 微生物回复突变试验 • 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 • 啮齿动物微核试验 • 微生物电极法的致突变试验 返回

15. 生殖毒性试验 • 一般生殖毒性试验 • 致畸敏感期毒性试验 • 围生期毒性试验 返回

16. 含量（效价）测定 • 含量表示方法： 用百分含量表示，适用于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物。 用生物效价或酶活力单位表示，适用于酶类和蛋白质类等药物的测定。

17. 含量测定 • HPLC法 纯度要达95%以上 凡有紫外吸收的物质均能在图谱上显示出来。 • 十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法） 表明产品中的蛋白质纯度。

18. 效价测定 采用国际或国家参考品，以体内或体外法（细胞法）测定其生物学活性，并标明其活性单位。 一般用免疫学方法测定的效价不能代替生物学效价，只能作为中间品的质量控制。 同时，应测定蛋白质含量，计算出特异比活性，活性以单位数/毫克蛋白（IU /mg)表示。

19. 谢谢！

20. HPLC胰肽图谱法可用于鉴别 重组与天然蛋白质结构的同一性，比较各批重 组蛋白质产物一级结构的一致性，监控由于蛋 白水解、脱氨和氨基酸替代等原因而产生的重 组蛋白质分子结构的微小改变。此法高度专一 ，具分辨率好、检测灵敏度高等特点。 返回