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填料的选择

填料的选择. 填料. 正相：硅胶，或者是硅胶键合基团 CN( 腈基 ) 、 DIOL （二醇基）、 NH2 （氨基）等。 —— 正相固定相是极性的，用来保留极性物质 反相： C18 （十八烷基）、 C8 （辛烷基）、 C2 （乙基）、 CH （环己烷基）、 PH （苯基）都是反相固定相。 —— 反相固定相用来保留非极性或弱极性的分析物 大孔树脂

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填料的选择

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Presentation Transcript

  1. 填料的选择

  2. 填料 正相：硅胶，或者是硅胶键合基团CN(腈基)、DIOL（二醇基）、NH2（氨基）等。 ——正相固定相是极性的，用来保留极性物质 反相：C18（十八烷基）、C8（辛烷基）、C2（乙基）、CH（环己烷基）、PH（苯基）都是反相固定相。 ——反相固定相用来保留非极性或弱极性的分析物 大孔树脂 一般用于天然产物的初步分离。在进行天然产物提取分离时，一般流程为：溶剂提取→初处理（过大孔树脂、萃取、结晶等）→高纯度精制（过硅胶柱、C18柱等） 离子交换树脂 离子交换树脂主要用与生物碱的富集 氧化铝 一般用于碱性化合物的分离

  3. 柱子填料的选择 正相硅胶:微酸性介质,用于中等极性及弱极性(不含酸碱)化合物分离 C18反相硅胶:用于纯化中等至高极性物质:碳水化合物,酸 性化合物,肽类,杂环化合物,离子化合物 氨基取代填料:用于碱性化合物的分离(不能用于醛/酮以及能与氨基反应的化合物). 氧化铝填料:碱性、中性、酸性 硅酸镁填料：用于纯化酸敏感性化合物和弱碱性化合物，特别是保护基团（如TMS） 氰基取代填料 双羟基（二醇）填料

  4. 正相硅胶 微酸性介质 活性基团 Si-OH 氢离子很容易解离 实际活性基团Si-O- 使用寿命较短，通常用于一次性柱

  5. 正相硅胶的不足 正相硅胶的酸性 pH可能会使酸性或碱性物质的分离困难 要求对流动相进行修饰 碱性物质用TEA 酸性物质用AcOH 分辨率低 从TLC到柱色谱重现性不好 修饰引起额外的不便 分离前必须先更换和冲填溶剂 分离后必须去除TEA 和AcOH 用适当的溶剂进行额外的抽提和洗涤 将混合物浓缩至油状，放在真空中过夜 修饰剂可能与化合物反应

  6. C-18 反相填料 用于纯化中等至高极性物质: 碳水化合物, 酸性化合物, 肽类, 杂环化合物, 离子化合物 典型溶剂系统: Water/Acetonitrile, Water/Methanol 需要更长的平衡时间 流速比正相柱低 如果未变干而且保存在80%有机溶剂+20%水溶液中，可重复使用

  7. 其他介质 氨基取代介质 碱性氧化铝 中性氧化铝 离子交换（SCX，SAX） 氰基取代

  8. 氨基取代介质 氨基基团连接在硅上，取代酸基团 碱性固定性 不需使用TEA 减少了由于酸/碱反应引起的副反应 对于含有碱性组分的化合物有更好的分离效果 既可用于正相，又可用于反相条件 无需从组分中去除溶剂，减少了过程时间 如果不使用时保存在异丙醇中，可重复使用 NH2 Si

  9. 碱性化合物的分离 Normal Phase Column Solvents: Hexane/EtOAc

  10. 碱性化合物的分离 Amine Column Solvents: Hexane/EtOAc

  11. 碱性氧化铝 碱性固定相 无需流动相修饰剂 用于纯化有碱性特性的化合物

  12. 碱性化合物的分离 Normal Phase Column Solvents: Hexane/EtOAc

  13. 碱性化合物的分离 Basic Alumina Column Solvents: Hexane/EtOAc

  14. 中性氧化铝 用于纯化对酸敏感的化合物

  15. SCX SCX = Strong Cation Exchange 保留碱性化合物

  16. SCX 柱:2 个可能的用途 除杂工具: 纯化含有碱性杂质的中性化合物 被吸附的碱性化合物可以用含5%NH3的MeOH进行洗脱 纯化具有碱性性质的化合物

  17. 碱性化合物的分离 Normal Phase Column Solvents: Dichloromethane/methanol

  18. 碱性化合物的分离 SCX Column Solvents: Dichloromethane/methanol

  19. SAX SAX = 强阴离子交换 可结合酸性性质的化合物

  20. SAX column:2 个用途 除杂工具: 纯化含有酸性杂质的中性化合物 被吸附的碱性化合物可以用含5%AcOH的MeOH进行洗脱 纯化具有酸性性质的化合物

  21. 酸性化合物分离 Normal Phase Column Solvents: Hexane/EtOAc

  22. 酸性化合物分离 SAX Column Solvents: Hexane/EtOAc

  23. 氰基取代 当使用正相溶剂条件时，氰基取代硅胶的功能与正相硅胶相似 在反相条件下，与C-18功能相似 当用常规固定相分离困难时，可作为替代选择 C N Si

  24. 二醇（双羟基） 对于正相硅胶分离困难，可用该介质代替 比正相硅胶的极性低 与正相硅胶具有不同的选择性 Si O OH OH

  25. 二醇固定相提高了分离效果 正相介质 二醇介质 30°C 1.Phenol2.Catechol3.Resorcinol4.Hydroquinone5.Pyrogallol6.Phloroglucinol Conditions: Normal phase

  26. HPLC中常用的固定相

  27. ODS填料介绍 ODS-AQ填料 ODS-E填料 COSMOSIL制备填料 C18-PREP C18-OPN

  28. ODS-AQ填料(适用于分离亲水性化合物) 基本参数 载体：多孔硅胶微球 粒径：30-50μm 键合相：C18 pH范围：2－9 • 特点 • 通用型反相色谱柱 • 重复性好 • 含碳量较高，保留性好 • 对生物样品适应性强 • 性价比高

  29. 皂苷类化合物制备图 仪器：EZ Purifier 中压制备系统； 色谱柱：3根12g制备柱串联，填料为ODS-AQ（30-50μm） ； 流动相：A— 0.1％甲酸水溶液，B— 乙腈，梯度洗脱。 监测波长：214nm； 收集波长：254nm； 流速：25ml/min。

  30. ODS-E填料 基本参数 载体：多孔硅胶微球 粒径：40-60μm 键合相：C18 单封尾 适合分离中等碱性以下化合物

  31. COSMOSIL制备填料 COSMOSIL提供基于多孔球形硅胶填料的正相和反相填料。硅胶填料采用多孔球形硅胶颗粒，与不规则硅胶相比具有更高的分离性能，更低的柱压和更好的重现性。

  32. COSMOSIL填料选择指南 反相 40C18-OPN 75C18-OPN 有机溶剂比例＜70% 开放柱层析 快速柱层析 75C18-PREP 140C18-PREP 有机溶剂比例＞70% 中压色谱柱 40C18-PREP 正相 SL-II-PREP 耐酸性化合物（弱酸下不分解）

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