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项 目 八. 黄体酮的质量分析. 项目：黄体酮的质量分析. 结构特征：. △ ４ -3- 酮. C 17 - 酮基. 基 本 信 息. 激素 （ Hormone ，荷尔蒙） 是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为 靶器官 的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。. 基 本 信 息. 基本结构. 甾体激素类药物均具有 环戊烷骈多氢菲 母核。. 18. 12. 13. 17. 11. 19. D. C. 16. 1. 9. 14. 2. 15.
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项 目 八 黄体酮的质量分析
项目：黄体酮的质量分析 结构特征： △４-3-酮 C17-酮基
基 本 信 息 激素（Hormone，荷尔蒙） 是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。
基 本 信 息 • 基本结构 甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。 18 12 13 17 11 19 D C 16 1 9 14 2 15 10 8 A B 5 3 7 4 6
基 本 信 息 《中国药典》现行版收载的肾上腺皮质激素类代表性药物有：氢化可的松 、泼尼松 、醋酸地塞米松 等；雄性激素代表性药物有：甲睾酮、丙酸睾酮等，蛋白同化激素代表性药物有：苯丙酸诺龙 等；孕激素类代表性药物有：黄体酮、醋酸甲地孕酮等；雌激素类代表性药物有：雌二醇 、炔雌醇 原料及制剂等。口服避孕药代表药物有：炔诺酮、炔诺孕酮
工作任务分解 （一）性状 （二）鉴别：呈色反应、IR （三）杂质检查：其他甾体 （四）含量测定：HPLC
（一）黄体酮的性状检测 药典标准（原料药） 分析内容： 熔点；比旋度测定：
（二）黄体酮的鉴别试验 药典标准（原料药）
（二）黄体酮的鉴别试验 1.甲酮基的成色反应——必需知识 这是黄体酮的灵敏、专属的鉴别方法。
甲酮基的呈色反应——必需知识 • 适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。 孕激素 • 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。 （1）甲酮基： 黄体酮 蓝紫色 亚硝基铁氰化钠 其他甾体 淡橙色或不显色 • 黄体酮专属性反应。
（二）黄体酮的鉴别试验 2.酮基的成色反应——必需知识 鉴别方法：取本品约0.5mg，置小试管中，加异烟肼约1mg与甲醇1ml溶解后，加稀盐酸1滴，即显黄色。
C3–酮基和C20–酮基成色原理 与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成腙。
黄色 HCl + 室温下长时间加热 3，20-双腙
成腙反应中 • C3–酮基空间位阻最小，最易起反应，室温下先生成单腙。 • C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。 • C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻碍，不发生反应。
ν 3300～3000cm-1 3000～2700cm-1 1900～1650cm-1 1650～1450cm-1 1000～650cm-1 3. IR法 3750～3300cm-1
黄体酮的结构特征与IR吸收峰的分析 结构特征： △４-3-酮 C17-酮基
C=O 870cm-1 20位酮基 C-H 1700cm-1 双键 1615cm-1 1665cm-1 3位酮基
知 识 拓 展 其他鉴别试验 1. 与强酸的呈色反应 强酸：H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl 原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与HSO4-作用呈色。
2. UV-ViS分光光度法 原 理 200-760nm有特征吸收。 其他共轭结构 △４-3-酮 苯环 240nm左右 280nm左右 方 法 可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。
知 识 拓 展 3. TLC法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 • 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。
知 识 拓 展 4. HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别： • 方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
（三）黄体酮的杂质检查 药典标准（原料药）
黄体酮检查其他甾体 Ⅰ.溶液的配制及仪器的调试：取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成每1ml含1mg的溶液（1）与每1ml含0.02mg的溶液（2），用含量测定项下的方法和溶液，取5μl注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。
黄体酮检查其他甾体 Ⅱ.测定方法：再分别取溶液（1）和溶液（2）各10μl，进样。记录至主成分峰保留时间的1.5倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过1个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的3/4。
2、HPLC法（主成分自身对照法） • 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积 ≤图A中峰1面积的四分之三
有关物质的检查 • 杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。 • 其他甾体：有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。
TLC法（主成分自身对照法） • 判定方法：规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色 例：氢化可的松中其他甾体的检查 供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：3.0mg/ml 对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1） 60μg/ml 层析：供试液 对照液 点样、展开、斑点检出。 判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。
与HPLC比较的特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。
（四）黄体酮的含量测定 药典标准（原料药）
HPLC法 USP、BP、JP均采用 • 测定对象：黄体酮药物的原料和制剂。 • 方法：RP－HPLC（内标法） 色谱条件：固定相 ODS，检测波长254nm 流动相 甲醇-水（65:35） 内标物 己烯雌酚 系统适用性试验：n>1000，R符合规定。
知 识 拓 展 异烟肼比色法 （1） 原理 HCl C3-酮基+异烟肼 异烟腙（黄） H2O 420nm 肾上腺皮质激素 雄性激素 蛋白同化激素 孕激素
供试液 无水甲醇 异烟肼 对照液 ℃ 60 A 暗60′ 知 识 拓 展 （2）方法：对照品法
知 识 拓 展 （3）影响因素 A.反应速度（反应专属性） • C3=O＞C17= O 、C20= O • C11= O 不反应 B. 溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响 对试剂的稳定性好 呈色强度较无水乙醇中高 对植物油的溶解度小 无水甲醇 无水乙醇
C.水分、温度、O2与光线的影响 知 识 拓 展 • 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ • O2与光线对反应的影响不大 • t℃ ↑ → ν↑ D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度 • 酸:异烟肼 = 2:1 盐酸浓度0.0074mol/L 最大A 异烟肼浓度0.00365mol/L
知 识 拓 展 • 分类 肾上腺皮质激素 雌激素 甾体激素 雄性激素 性激素 蛋白同化激素 孕激素
（一）肾上腺皮质激素 C17–醇酮基 （还原性） 天然皮质激素：氢化可的松 • 母核有21个碳原子 △4–3–酮基 （紫外吸收）
结构修饰 提高结构稳定性 增强抗炎作用 醋酸地塞米松 曲安息龙 地塞米松磷酸钠
一、结构与性质 1. 肾上腺皮质激素
21个碳，A环又共扼，17位位有α-醇铜， 9α-有F，16 α有羟基。
（二）雄性激素和蛋白同化激素 4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造 均明显降低雄性作用，增加蛋白同化作用 • 天然雄性激素：睾酮 △4–3–酮基 • 母核有19个碳原子 • A环中有△4–3–酮基结构
结构修饰 甲睾酮 丙酸睾酮 增加位阻，难代谢氧化，稳定性增强 可口服 增加脂溶性，制成油注射剂 可口服、延效
蛋白同化激素 • 母核有18或19个碳原子 苯丙酸诺龙 4-氯醋酸睾丸素
（三）孕激素 C17-α-甲酮基 天然孕激素：黄体酮 • 母核有21个碳原子 • 口服被迅速破坏失效，只能肌注 △4–3–酮基
结构修饰 口服、长效 醋酸甲地孕酮（孕酮类孕激素） 炔诺酮（睾酮类孕激素） 炔诺孕酮（睾酮类孕激素） 口服、长效，17-OH作成庚酸酯，注射一次可维持3个月
