160 likes | 294 Views
Agardiffusion. Metode standardiseret af Swedish Reference Group for Antibiotics (SRGA) Antibiotikadiscs fra Oxoid Isosensitest medium A,B og C fra Oxoid Tilsåning med 1/100 McF 0,5. Medium og antibiotika udvalg er tilpasset bakteriefund. Agardiffusion. Faktorer af betydning for resultatet:
E N D
Agardiffusion • Metode standardiseret af Swedish Reference Group for Antibiotics (SRGA) • Antibiotikadiscs fra Oxoid • Isosensitest medium A,B og C fra Oxoid • Tilsåning med 1/100 McF 0,5. • Medium og antibiotika udvalg er tilpasset bakteriefund.
Agardiffusion Faktorer af betydning for resultatet: • Substratet • Bakterielle faktorer • Antibiotika relaterede faktorer • Apparatur • Menneskelige faktorer
Substratet • Standardiseret medie • Næringsmængde understøtter god vækst • Agartykkelsen. OBS korrekt opbevaring. • pH påvirker bakterievækst og har ofte stærk indflydelse på antibiotikaeffekt. • Testet med ATCC stammer overfor en række antibiotika
Bakterielle faktorer • Bakteriens følsomhed, medfødt/erhvervet resistens • Lagfasens længde • Bakteriestammens væksthastighed, hurtig vækst => lille hæmningszone
Antibiotika • Antibiotikadepot; OBS opbevaring, minus fugt, holdbarhed • Antal disc i forhold til næringsmængde. • Evne til at diffundere ud i agar (stort molekyle => lille zone) • QC-certifikat. • Afpasses bakteriefund
Inkubation • Korrekt temperatur og evt. atmosfære (OBS inkubator). • Undgå for høje stakke af plader. (temperatur). • Tid fra tilsåning til antibiotika lægges på. • Tid fra pålægning til inkubation. • Inkubation 16 – 20 timer.
Antibiotikakonc. i agaren (Penicillin) Disk kant 20 Efter 2 t Efter 4 t 15 Efter 6 t 10 Efter 8 t 5 30 mm Hæmningszonediameter i mm Zonedannelse og tid
Menneskelige faktorer • Populationer? (tag fra 5 kolonier) • Tilsåningskvalitet • Standardisering af inokulum • Aflæsning (hvordan og hvor aflæses zonediameteren/radius) • Kendskab til resistensmekanismer • Løbende oplæring/videreuddannelse • Kvalitetskontrol
Aflæsning agardiffusion • Zonestørrelser aflæses i mm med skydelære • OBS: Bakterieslægt/-art • OBS: Strandbred/klippekant • OBS: Indikatorantibiotika • Zonestørrelse relateres til SRGA’s breakpoints • Oversættes til S, I eller R
Zonestørrelse? 80 % hæmning