80 likes | 317 Views
lac operon. 4. rep. E. T. lacY. lacA. C. P. lacI. DNS. DNS. O. lacZ. represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor. cAMP. laktóz. CAP. lacZ gén. 4. CAP. rep. - X-Gal kromogén szubsztrát. E. T. lacY. lacA. C. P.
E N D
lac operon 4 rep E T lacY lacA C P lacI DNS DNS O lacZ represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor cAMP laktóz CAP
lacZ gén 4 CAP rep - X-Gal kromogén szubsztrát E T lacY lacA C P lacI DNS DNS O lacZ represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor IPTG indoxyl galaktóz X-Gal
lacZ gén 4 permeáz CAP -gal pol transz- acetiláz rep - X-Gal kromogén szubsztrát E lacY lacA C P lacI DNS DNS O lacZ T represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor
lacZ gén a klónozásban 4 lacZ E -fragment T lacY lacA C P lacI DNS DNS O represszor CAP hely pol kötő hely operátor strukturális gének terminátor lacZ -fragment Idegen DNS lacZ- lacZ-
7. Immunhisztokémia 13 - immunfluoreszcencia fluoreszcens festék kecske anti-nyúl másodlagos antitest anti-C antitest Y nyúl anti-C elsődleges antitest Y A C A C Y B B Y Y B B B B C C Y A A sejtfelszíni antigének sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének A citoplazmatikus antigének A E E sejtmag sejtmag D D citoplazma citoplazma Közvetlen (direkt) módszer Közvetett (indirekt) módszer
7. Immunhisztokémia 13 DAB + H2O2 Ni-DAB + H2O2 peroxidáz peroxidáz peroxidáz peroxidáz - immunperoxidáz módszerek • - peroxidáz – diamino-benzidin (peroxid jelenlétében): barna csapadék • biotin – avidin – peroxidáz Y Kecske anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) Y kecske anti-nyúl másodlagos antitest Y Y nyúl anti-C elsődleges antitest peroxidáz Nyúl anti-C antitest Y A C B Y B B C A sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének A Y E sejtmag biotin D Y citoplazma anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) avidin Közvetett (indirekt) módszer anti-C antitest
7. Immunhisztokémia 13 DAB + H2O2 Ni-DAB + H2O2 - immunperoxidáz módszerek ABC módszer(ABC = avidin-biotin complex) Y Y avidin biotin peroxidáz Y anti-nyúl antitest (másodlagos antitest) Y elsődleges antitest antigén
7. Immunhisztokémia 13 Y alk. foszfatáz Anti-DIG antitest Y - alkalikus foszfatáz - digoxigenin – anti-digoxigenin – alkalikus foszfatáz alk. foszfatáz Y anti-nyúl antitest kecske anti-nyúl másodlagos antitest Y Y anti-C antitest nyúl anti-C elsődleges antitest alkalikus foszfatáz Y A C B Y B B C A sejtfelszíni antigének citoplazmatikus antigének A E Y sejtmag D alk. foszfatáz Y Anti-DIG antitest citoplazma Y DIG DIG Y Közvetett (indirekt) módszer anti-nyúl antitest anti-C antitest anti-C antitest