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自主创新性实验研究开题报告. PS-341 单独或联合应用反应停治疗两种恶性肿瘤的动物实验研究. 班级： 03 级七年制法文班 组员：郁嘉伦，沈富毅，潘隽玮，余昂，侯晓骏 指导：刘玮. 实验目的和意义. 结肠癌 是常见的消化道恶性肿瘤，在西方国家，其位于癌症死亡原因的第2位。 40%～50%单独采用根治性手术治疗的病人最终将复发，并因转移而死亡。 1990年以来，一些大型的随机临床研究表明，采用以5-氟尿嘧啶为基础的化疗方案，可以使死亡率降低约三分之一。但是，结肠癌属于化疗敏感性较差的肿瘤，且容易产生耐药性。.
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自主创新性实验研究开题报告 PS-341单独或联合应用反应停治疗两种恶性肿瘤的动物实验研究 班级：03级七年制法文班 组员：郁嘉伦，沈富毅，潘隽玮，余昂，侯晓骏 指导：刘玮
结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，在西方国家，其位于癌症死亡原因的第2位。结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，在西方国家，其位于癌症死亡原因的第2位。 • 40%～50%单独采用根治性手术治疗的病人最终将复发，并因转移而死亡。 • 1990年以来，一些大型的随机临床研究表明，采用以5-氟尿嘧啶为基础的化疗方案，可以使死亡率降低约三分之一。但是，结肠癌属于化疗敏感性较差的肿瘤，且容易产生耐药性。
在中国，白血病的发病率为十万分之三，每年新增约4万名白血病患者，其中2万多名是儿童。在中国，白血病的发病率为十万分之三，每年新增约4万名白血病患者，其中2万多名是儿童。 • 对于白血病的治疗学研究在过去十余年间虽然取得了长足的进步，但是目前能够经治疗获得长期缓解或痊愈的仅限于急性早幼粒细胞白血病。
因此，寻找新型药物单独或联合开展治疗，成为肿瘤治疗学研究的热点之一。因此，寻找新型药物单独或联合开展治疗，成为肿瘤治疗学研究的热点之一。 • 本实验拟将PS-341和反应停联用，以观察其对肿瘤的疗效。
PS-341 • 反应停
PS-341的作用机制 • PS-341是硼酸二肽衍生物，能够高度选择性抑制26S蛋白酶体，从而影响多种功能蛋白的含量，进而影响基因转录、细胞凋亡及细胞增殖等生理或病理过程。 • 已有研究表明，PS-341具有很强的抗肿瘤活性，尤其对多发性骨髓瘤、肺癌和淋巴瘤有较好的治疗效果。 • 2003年，PS-341（VELCADE）被美国FDA批准用于复发性或难治性多发性骨髓瘤的临床治疗。
PS-341的作用机制 PS-341通过稳定I-κB ，抑制NF-κB活性，从而激活caspase途径诱导细胞凋亡。 PS-341可以通过促进Fas蛋白和FasL表达，激活caspase，诱导细胞凋亡。
反应停 • 反应停属于老药新用，关于反应停抗肿瘤作用机制的研究从来没有停止过。 • 反应停具有抗血管生成作用、免疫调节作用、抑制肿瘤坏死因子及非特异性抗炎作用。
反应停的抗肿瘤作用机制 • 引起细胞凋亡（NF-B ） • 抗血管生成作用（VEGF、bFGF） • 体液免疫调节作用（TNF-α、IL-6） • 细胞免疫调节作用（CD8+细胞）
常用肿瘤动物模型 • 同系移植鼠白血病细胞株 • 裸鼠/SCID mice 移植人白血病细胞株 • Transgenic mice • Knock in/Knock out mice • 四环素诱导系统（tet-on/tet-off）
主要研究内容 • 建立LS-174-T结肠腺癌裸鼠模型与移植性AML小鼠模型。 • PS-341单独或联合应用反应停治疗小鼠白血病模型的体内效果观察：利用以上两种肿瘤动物模型，根据已有文献报道的PS-341和反应停的体内使用剂量，研究这两种药物对肿瘤生长的影响，明确PS-341与反应停治疗AML和结肠癌的体内疗效。 • 以结肠癌裸鼠与AML小鼠为研究对象，观察PS-341单独或联合应用反应停对体内肿瘤的增殖、凋亡及血管生成的影响。
PS-341(or with 反应停) 抗结肠癌/AML的疗效观察 体内作用及机制的研究 单剂量一次给药 in vitro in vivo 6、12、24小时 Control ，PS-341， PS-341with反应停 收集外周血、骨髓、肝脾或瘤体标本 结肠癌：瘤体约2mm开始 AML： 移植后7天开始 Cell growth morphology Annexin V Cell cycle ① 病理学观察 ④ TUNEL ② 细胞形态学 ⑤ PCNA ③ Annexin V 瘤体生长情况 /生存时间 组织浸润情况 CD31 PS-341是否具有确实疗效 明确PS-341在体内对肿瘤细胞的作用及机制
已经具备的研究基础与条件 • 课题组已经建立了异种移植性结肠癌裸鼠模型和同种移植性AML小鼠模型。 • 课题组已经初步观察了PS-341作用于LS-174-T结肠癌细胞的体外效应。结果显示，纳摩尔水平的PS-341即可显著抑制LS-174-T细胞的生长，并诱导LS-174-T细胞发生凋亡。 • 课题组已经具备所有的实验设备、试剂和技术。
control control 32nM 96nM 32nM 96nM PS-341 PS-341 Growth inhibition Viability LS-174-T cells treated with PS-341 for 24hrs
PS-341 control 32nM 96nM LS-174-T cells treated with PS-341 for 24hrs
创新性 • 作为一种临床潜力极大的新型抗肿瘤药物，PS-341对于结肠癌或AML动物模型的体内效应研究至今尚无报道。 • 本课题的研究，将初步明确PS-341单独或联合应用反应停对这两种恶性肿瘤的疗效，并为以后的临床试验奠定基础。
预期研究成果 • 明确PS-341单独或联合应用反应停治疗结肠癌裸鼠与AML小鼠模型的体内效应。 • 本课题将于11月下旬结束并完成论文撰写。
参考文献 • New drugs in acute myeloid leukemia，Curr Oncol Rep. 2002 Sep;4(5):369-74） • Effects of the proteasome inhibitor PS-341 on tumor growth in HTLV-1 Tax transgenic mice and Tax tumor transplants，Shibani Mitra-Kaushik, BLOOD, 1 AUGUST 2004 • Augmenting Chemosensitivity of Malignant Melanoma Tumors via Proteasome Inhibition: Implication for Bortezomib (VELCADE, PS-341) as a Therapeutic Agent for Malignant Melanoma，Katayoun I. Amiri，[CANCER RESEARCH 64, 4912–4918, July 15, 2004] • Proteasome inhibitor PS-341 inhibits human myeloma cell growth in vivo and prolongs survival in a murine model，leblanc，Cancer Res. 2002 Sep 1;62(17):4996-5000 • Phase I trial of the proteasome inhibitor PS-341 in patients with refractory hematologic malignancies.J Clin Oncol. 2002 Nov 15;20(22):4420-7. • Proteasome inhibitors in the treatment of B-cell malignancies. Clin Lymphoma. 2002 Jun;3(1):49-55. Review. • Antitumor activity of thalidomide in refractory multiple myeloma.N E
