肾功能测定

1. 肾功能测定 2011.3

2. 教 学 要 求 （一）掌握肾脏疾病的生物化学实验诊断指标及肾功能实验项目的选择原则。 （二）掌握脲酶法测定尿素、碱性苦味酸法测定肌酐的原理、方法。 （三）熟悉尿素、肌酐测定的临床意义。

3. 一、肾脏的基本功能 肾脏的三大功能： 泌尿、调节和内分泌功能

4. 二、肾脏疾病的生物化学实验室检查 1.尿液检查 2.肾功能检查 3.肾脏免疫学检查

5. 肾功能试验方法的选择 • 明确检查的目的。 • 2.按照所需检查病变部位选择与之相应的功能试验，方法应由简到精、由易到难。 • 3.欲了解左、右肾的功能时，需插入导尿管分别收集左、右肾尿液。 • 4.在评价检查结果时，必须结合病人的病情和其它临床资料，进行全面分析，最后作出判断。

6. 三、临床实验室肾功能检测项目 1.血清尿素 2.血清肌酐 3.血清尿酸 4.血清二氧化碳结合力 5.24小时尿蛋白定量 6.24小时尿微量清蛋白定量

7. 一、尿素测定（酶偶联法） 二乙酰-肟法 脲酶法

8. （一）实验原理 脲酶 尿素＋H2O 2NH4+＋CO2 GLDH NH4+＋α-酮戊二酸＋NADH L-谷氨酸＋NAD+＋H2O

9. （二）试剂 标准液: 7.14mmol/L 试剂1： Tris缓冲液(pH8.50)150mmol/L а-酮戊二酸 　　　 8.0mmol/L NADH 0.2mmol/L

10. 试剂2： Tris缓冲液(pH8.50)150mmol/L 脲酶 　　　　　 ≥1.5kU/L GLDH 　　　　　 ≥0.3kU/L а-酮戊二酸　　　　 8.0mmol/L NADH 0.2mmol/L

11. （三）操作步骤 1、操作参数：波长340nm；温度：37℃； 2、测定模式：连续监测法，延迟时间30 秒，测定时间30秒。

12. 3.取试管2支 标准管 测定管 混匀 血清 20ul 尿素标 准液20ul 试剂2 400ul 试剂1 1.2ml 4. 混匀，立即吸样，记录结果

13. （四）注意事项 1.严重的脂肪乳糜、溶血和黄疸可使 测定结果偏高。 2.血氨升高时，可使测定结果偏高。 3.试剂空白吸光度应大于1.0。

14. 升高： 生理性因素 肾前性 肾性 病理性因素 肾后性 （五）临床意义 参考值 健康成年人：2.86-8.20 mmol/L 降低：严重肝病等。

15. 表3 尿素、肌酐在肾功不全中的临床意义

16. (六)方法学评价 1.线性上限达17.6mmol/L。 2.简便、快速、较稳定、准确。 3.几乎不受溶血、脂血、黄疸干扰

17. 二、肌酐测定 (一) Jaffe反应法（碱性苦味酸法） 1.原理 标本中的肌酐与苦味酸盐作用生成黄红色的苦味酸肌酐复合物。在波长500nm处，形成的速率与血清中肌酐含量成正比。

18. 假肌酐:能与碱性苦味酸生成红色的非肌酐物质。假肌酐:能与碱性苦味酸生成红色的非肌酐物质。 维生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴以及高浓度葡萄糖、蛋白质和一些抗生素如青霉素G、头抱噻吩、头抱西丁、头泡唑啉等。 红细胞内假肌酐含量较高，不宜用全血标本。胆红素和半胱氨酸等可抑制Jaffe反应，使测定结果偏低。

19. 消除假肌酐干扰的方法: 吸附去除干扰物：制备无蛋白滤液，加Lloyd试剂(硅酸铝、纯化漂白土)或离子交换树脂等预处理无蛋白滤液。 采用速率法测定：根据肌酐与碱性苦味酸形成复合物的速度与假肌酐不同而测定之。如乙酰乙酸在20s内已与碱性苦味酸反应完成，其他多数干扰物则在80 s后才与苦味酸合较快的反应，而20~80 s之间，肌酐的反应占绝对优势，改选择25~60s的反应速率，改进了特异性。 速率法常见的干扰是高胆红素血症的负干扰，采取加胆红素氧化酶或铁氰化钾等消除干扰。

20. 2.试剂组成 （1）碱性溶液：NaOH 300mM （2）苦味酸溶液：苦味酸 20mM （3）肌酐标准液： 265.2 umol/L （4）工作液：碱性试剂与苦味酸溶液等量混合组成工作液。

21. 3.测定步骤 （1）波长 500nm （2）温度 37℃ （3）延迟时间 30秒 反应时间 60秒 （4）工作液用量 1000ul 样本用量 100ul

22. 混匀， 37℃ ，延迟时间30秒，反应时间60秒。用空白管调零，读取各管吸光度。

23. Jaffe试剂1.0ml 血清100l 遵医检验 基本操作过程 37℃ Delay time30s Mensurate time 30s λ=500nm 0.250 0.000

24. 4.计算： 样本△A∕分钟 CREA(umol∕L)= 标准△A∕分钟 ×标准液浓度

26. 下 次 实 验：设计性实验