经口急性毒性试验

1. 经口急性毒性试验

2. 实验原理 在24小时内一次或多次给予受试化学物，观察和了解实验动物产生的急性毒性及其强度、中毒死亡特征以及可能原因。 根据受试物引起实验动物死亡与染毒剂量之间的剂量-反应关系，计算半数致死量( LD50)。

3. 实验目的 ◆ 掌握化学物毒性评价试验方法 ◆ 掌握经口灌胃技术 ◆ 学习中毒症状观察方法。

4. 实验内容 • 试验动物的选择和性别鉴定。 • 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 • 急性毒性试验常用染毒途径和方法。 • 急性毒性反应的观察和LD50计算。

5. 材料和试剂 • 实验动物：健康小鼠 • 器 材：小鼠灌胃针、电子天平 • 动物体重计、外科剪刀和镊子 • 试 剂：受试物

6. 实验动物编号的标记方法 • 颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 • 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） • 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 • 咖啡色：2%硝酸银 • 黑色：煤焦油的酒精溶液

7. 实验动物编号的标记方法 单 色 法 大小鼠标记方法（单色法n<10）

8. 实验动物编号的标记方法 单色法标记原则：单色法编大于10的号码时，我们规定顺时针旋转，后一位必需大于前一位数，例如：可以编，12，13，14……19，但不能编10，11，20，21，22，30，31，32，33，等，以此类推。100以内最大能编89号。 大小鼠标记方法（单色法n>10）

9. 实验动物编号的标记方法 双 色 法 大小鼠标记方法（双色法n<10）

10. 实验动物编号的标记方法 红色表示十位数： 头部染红色为10 左前肢为20 左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）

11. 实验动物编号的标记方法 其它标记方法 • 烙印编号法； • 体内埋号编号法； • 耳孔编号法； • 挂牌编号法；

12. 实验动物 预实验 秤体重 确定大致的 LD0和LD100 编号 分组 （随机数字表法） 组数和剂量 灌胃操作 中毒症状观察和死亡纪录 计算LD50 实验步骤

13. lgLD100 – lgLD0 d = n-1 确定组距的方法 式中：d---为组距 n---为设计时确定的剂量组数

14. 急性毒性实验记录 受试物 名称： 提供单位： 染毒剂量： mg/kg 染毒途径： 动物种属品系： 动物来源： 合格证号： 室温： 相对湿度： 组别 染毒剂量 (mg/kg) 动物编号 性别 体重 (g) 染毒时间 症状 及出现时间 死亡时间 体重记录(g) ……

15. LD50的计算—寇氏法 寇氏法 • Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量； • 此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。

16. LD50的计算—寇氏法 计算公式: lgLD50=1/2Σ(Xi + Xi+1)(Pi+1 - Pi) 式中: (Xi + Xi+1) ---- 为相邻两个试验组剂量之和 (Pi+1 - Pi) ---- 为相邻两组死亡率之差。 各组剂量为等比级数时简化为 lgLD50=Xm - d/2Σ(pi+1 + pi) 式中Xm为最高剂量对数；d为相邻两组剂量对数之和。

17. LD50标准差和95%可信限计算方法 Pi(1- Pi) SlgLD50=d Σ n- 1 式中: Pi ---- 死亡率， n ---- 每组动物数 LD5095%可信区间=Lg-1(lgLD50±1.96S lgLD50

18. 急性毒性评价 根据实验动物的中毒症状、出现死亡的时间和LD50，参照化学物质毒性分级标准，评价受试物的急性毒性大小及毒性特征。

19. 注意事项 • 灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食（不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。 • 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。 • 通常灌胃体积以体重的1%～2%计算，最多不超过3%，即每100g体重溜胃l～2ml，最多不超过3ml。根据实际经验得出的各种实验动物灌胃量的极限是:小鼠0.5～1ml，大鼠4～5m1。

20. 思考与讨论 急性毒性资料在评价环境 污染物毒性中的意义？

21. Thank You!