1 / 55

Г еном

Г еном. Лекция 10. Лекция 9. Плазмиды - 10 3 - 10 4 Вирусы - 10 3 - 10 4 Митохондрии и Хлоропласты - 10 4 - 10 5 ПРОКАРИОТЫ - 10 5 - 10 6 ЭУКАРИОТЫ Дрожжи - 10 7 Животные - 10 8 - 10 9 Растения - 10 9 - 10 11. 2  500 знаков/стр, 400 стр/книгу 10 6 знаков/книгу.

troy-contreras
Download Presentation

Г еном

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Геном Лекция 10 Лекция 9 Плазмиды - 103 - 104 Вирусы - 103 - 104 Митохондрии и Хлоропласты - 104 - 105 ПРОКАРИОТЫ - 105 - 106 ЭУКАРИОТЫ Дрожжи - 107 Животные - 108 - 109 Растения - 109 - 1011 2 500 знаков/стр, 400 стр/книгу 106 знаков/книгу

  2. Автоматическое секвенированиеОпределение первичной структуры ДНК In January 2012, Life Technologies introduced a sequencer to decode a human genome in one day for $1,000

  3. Автоматический синтез ДНК

  4. Гибридизационная диагностика генов с флуоресцентными метками Массовый анализ на микрочипах Анализ на хромосомах

  5. С 2000 по 2009 гг число людей, живущих с ВИЧ в Восточной Европе и Центральной Азии, увеличилось почти в три раза. В 2009 г, по оценкам, это число достигло 1,4 млн чел (т.е. 1 из неск 100),в 2000 г оно было0,53 В мире насчитывается от 31 до 35 миллионов ВИЧ-инфицированных

  6. Получение ДНК Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Кэрри Маллис Нобелевская премия по химии 1993 г.

  7. AAAAA TTTTT AAAAA TTTTT AAAAA Oligo dT primer is bound to mRNA TTTTT RT Reverse transcriptase (RT) copies first cDNA strand RT Reverse transcriptase digests and displaces mRNA and copies second strand of cDNA RT Double strand cDNA КопированиемРНКв кДНКобратной транскриптазой

  8. B. Denature 96º 50º C. Anneal primers 72º D. Polymerase binds A. Double strand DNA 50º Taq Taq

  9. 72º 1 96º 2 F. Denature 3 4 Taq Taq E. Copy strands Taq Taq First round of cDNA synthesis (4 strands)

  10. 1 2 G. Anneal primers 50º 3 4

  11. Taq Taq Taq Taq 1 72º 2 H. Polymerase binds 3 4

  12. 1 Taq 72º 2 Taq I. Copy strands 3 Second round of cDNA synthesis (8 strands) Taq Taq 4

  13. 1 J. Denature at 96º Anneal primers at 50º 2 3 4

  14. 1 72º K. Bind polymerase (not shown) and copy strands 2 3 Third round of cDNA synthesis (16 strands) 4

  15. 1 L. Denature at 96º Anneal primers at 50º 2 3 4

  16. 1 M. Copy strands at 72º 72º 2 3 Fourth round of cDNA synthesis (32 strands) 4

  17. 1 cDNA strands (32) are now shown as lines 2 3 4

  18. 1 After 5 rounds there are 32 double strands of which 24 (75%) are are same size 2 3 4

  19. Эндонуклеазы рестрикции II(рестриктазы)гидролизуют ДНК по определеннымучасткам

  20. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ)‏

  21. Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ)‏ Сэр Алек Джеффрис, 1985

  22. Дактилоскопия ДНК Идентификация личности Идентификация родства Идентификация царской семьи Инцест Египетских фараонов Кто была Ева и откуда она Неандертальцы и Homo sapiens Полиморфизм тандемных повторов (STR) 1998 CODIS: Combined DNA Index System

  23. Где родилась Ева?В Мемфисе, Вавилоне или Мохенджо-Даро? В Мемфисе, Африка

  24. Рекорды дактилоскопии ДНК 2006 г. идентификация ДНК через 33 тыс лет

  25. Что такое клонирование? Клон – генетически идентичное потомство одной клетки (одного организма) Клонирование: - живого объекта (организма, клеток), - неживого объекта (ДНК) – жаргон!

  26. КЛОНИРОВАНИЕ – точное воспроизведение живого объекта в нескольких копиях... Все «копии» должны обладать идентичной наследственной информацией, т.е. нести идентичный набор генов. Генетики получают клоны размножением партеногенезом, т.е. бесполым путем, без предшествующего оплодотворения. Естественное клонирование человека – феномен однояйцевых близнецов. Л.И. КорочкинКлонирование ДНК – жаргон!

  27. Не путать с “Репродуктивной медициной” ЭКО25 июля 1978 г.Louise Brown 30 лет – 4 млн The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2010 Robert G. Edwards University of Cambridge, UK "for the development of in vitro fertilization”

  28. Не путать с “Пре-имплантационной диагностикой и естественным терапевтическим “клонированием” Клетки НЕ разбирают на компоненты и детей НЕ убивают! Естественное выращивание генетически недефектного брата (сестры) для пересадки органа (костный мозг)‏ генетически дефектному родственнику Молли и Адам Нэш с родителями окт. 19, 2000 авг (рожд)‏

  29. Пересадка ядер и клонирование“Don’t clonehumans!” Science2001, 291, 2552

  30. Цикл III Генотип и фенотип 8. Регуляция, передача сигнала (рак)‏ 9. Геном, плазмиды, вирусы (ВИЧ) 10. Генетическая инженерия (ГМО)

  31. Дополнительная литература www.issep.rssi.ru

  32. Конструирование рекомбинантных ДНК

  33. Генная инженерия - 4/5 основных этапа In vitro (в пробирке)‏ 1. Получениегенов (ПЦР)‏ 1’. Выбор вектора 2. Получениерекомбинантных ДНК In vivo (в клетке)‏ 3. Введениерек. ДНК в клетку (трансформация)‏ 4. Отборцелевыхклеток (скрининг) Библиотеки генов‏

  34. Этап 1. Получение ДНК Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Кэрри Маллис Нобелевская премия по химии 1993 г.

  35. Этап 2. Векторная ДНК

  36. Вектор для прокариот

  37. Получение рекомбинантных ДНК

  38. Искусственная мини-хромосома Стрелка показывает на искусственную мини-хромосому, которая функционирует как натуральная (голубая) Может служить мега-вектором для клонирования ДНК

  39. Этап 3. Трансформация -введение ДНК в клетку Физические: Слияние мембран: Микроинъекция Липосомы Электропорация Рецепторный Эндоцитоз Биобаллистика (W, Au – 0,1 мкм)‏ Химические: - Ca2+ Рекомбинантные вирусы (?)‏ • Аденовирус • Герпеса • ВИЧ

  40. Этап 4 «КлонированиеДНК»

  41. ИДЕНТИФИКАЦИЯ КЛОНОВ с рекомбинантной ДНК при помощи зонда

  42. Гены флуоресцентных белков медузы работают в бактериях

  43. Цель введения нового гена в клетку: Замена дефектного гена для восстановления функции Новый ген для изменения фенотипа (новые свойства)‏ - Новый ген для продукции новых веществ (клеточные фабрики или фабрики - организмы)‏ Делеция гена в клетке Генетический нокаут (ДНК)‏ Генетический нокдаун (мРНК)‏ Трансгенные организмы(ГМО, ГМП)‏

  44. Рекомбинантные белки, разрешенные для лечения человека БЕЛОК ЗАБОЛЕВАНИЕ Вакцины Моноклональные антитела Антигемофильный фактор Гемофилия Гормон роста Дефицит у детей ДНКаза I Муковисцидоз Инсулин Сахарный диабет Интерлейкин Рак почки Интерфероны Множественный эффект Тканевый активатор плазминогена Острый инфаркт миокарда (тромболитик) Острая обширная эмболия легочной артерии Эритропоэтин Анемия, заболевания почек

  45. Получение трансгенныхрастенийустойчивость кнеблагоприятным факторам и полезные потребительские свойства

  46. Получениетрансгенныхживотных

  47. Гены флуоресцентных белков медузы работают в животных Химера из белка клетки (раковый белок)‏ и флуоресцентного белка

  48. Нобелевская премия по химии 2008 Osamu Shimomura Martin Chalfie Roger Y. Tsien for the discovery and development of the green fluorescent protein, GFP

More Related