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計畫編號： 100-B1-1 主持人：李桂楨、李振綱 計畫領域別：生命科學 - 工程

跨領域 『 蛋白質工程 』 專題學習 利用螢光顯微影像及表面電漿共振分析 小分子化合物抑制 amyloid- b 聚集的情形. 計畫編號： 100-B1-1 主持人：李桂楨、李振綱 計畫領域別：生命科學 - 工程.

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計畫編號： 100-B1-1 主持人：李桂楨、李振綱 計畫領域別：生命科學 - 工程

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Presentation Transcript

  1. 跨領域『蛋白質工程』專題學習 利用螢光顯微影像及表面電漿共振分析 小分子化合物抑制amyloid-b聚集的情形 計畫編號：100-B1-1 主持人：李桂楨、李振綱 計畫領域別：生命科學-工程

  2. 本子計畫的目標在培育生命科學與化學工程跨領域人才。計畫將甄選4名理工相關科系大一或大二的學生，藉由問題導向的方式學習參與跨領域專題研究。參與學生分別於本校生命科學系及台科大化學工程系實驗室學習，包括研讀相關研究論文、參與實驗設計、操作及討論等，並鼓勵學生選修相關課程、學習新知。計畫之執行將使參與的學生能習得生物工程基本知識及研究經驗，以作為其未來進入相關研究領域的基礎。計畫中將以Ab42蛋白為例，訓練學生基因選殖、原核/真核蛋白質表達、純化的分子生物技術，及利用螢光顯微影像/表面電漿共振技術，分析小分子抑制物與Ab42的結合情形。Ab42將被置於GFP蛋白N端並表現於HEK-293細胞，Ab42的快速錯誤摺疊及聚集，將導致Ab42-GFP融合蛋白亦錯誤摺疊，因此無螢光顯現。若小分子抑制物結合而抑制Ab42聚集，GFP螢光即能顯現。此外，His6-Trx-Ab42重組蛋白將被表現於E. coli及純化，再利用表面電漿共振技術來分析此重組蛋白與小分子抑制物的結合情形。

  3. Ab42-GFP基因選殖 (HindIII-BamHI片段) (BamHI- EcoRI片段) (EcoRI-NotI片段)

  4. His6-Trx-Ab42基因選殖 Ab42 Trx (thioredoxin) Tag

  5. DMSO 小分子抑制物 錯誤摺疊、無螢光 正確摺疊、有螢光 Congo red Curcumin 真核細胞中Ab42-GFP與小分子抑制物結合之螢光顯微影像觀察 (Congo red, Curcumin)

  6. Ni++ chelating agent (IDA or NTA) grafted onto sensor surface Ni++ chelated on the surface His6-Trx-Ab42 immobilized via metal affinity interaction between His6 and immobilized Ni++ Response monitored if inhibitor captured by immobilized His6-Trx-Ab42 His6-Trx-Ab42與小分子抑制物的表面電漿共振分析

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