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血液小组

血液小组. 白血病的免疫分型及临床应用 血小板疾病分类及研究途径. 导 师： 胡翊群 汇 报 人：毛彦杰 马玲瑛 小组成员：刘维纯（组长）陈勰 颜佳毅 顾韧赜 林紫薇. 白血病的免疫分型及临床应用. 1. 细胞免疫标记检查及其白血病分子标记 细胞膜免疫标记 细胞质免疫标记 细胞核标记 2. 免疫标记的临床实际应用（导师小组活动内容） 3. 白血病的免疫分型研究进展. 急性白血病的单克隆分子标记. 干细胞 : CD34, HLA-DR, Tdt, CD45 B 细胞 : CD19, CD20, CD22, CD79a

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Presentation Transcript

  1. 血液小组 白血病的免疫分型及临床应用 血小板疾病分类及研究途径 导 师： 胡翊群 汇 报 人：毛彦杰 马玲瑛 小组成员：刘维纯（组长）陈勰 颜佳毅 顾韧赜 林紫薇

  2. 白血病的免疫分型及临床应用

  3. 1.细胞免疫标记检查及其白血病分子标记 细胞膜免疫标记 细胞质免疫标记 细胞核标记 2.免疫标记的临床实际应用（导师小组活动内容） 3.白血病的免疫分型研究进展

  4. 急性白血病的单克隆分子标记 • 干细胞: CD34, HLA-DR, Tdt, CD45 • B细胞: CD19, CD20, CD22, CD79a • T细胞: CD2, CD3, CD5, CD7 • 髓系: CD13, CD33, CD117, anti-MPO • 巨核细胞: CD41, CD61

  5. 1.细胞免疫标记检查及其白血病分子标记 2.免疫标记的临床实际应用（导师小组活动内容） 免疫组化 流式细胞术 3.白血病的免疫分型研究进展

  6. 免疫组化原理概述 原理：直接法或间接法定位特异性的 分子抗原 标记物： 酶类（AP ）荧光素(FITC PE)

  7. 免疫组化 实验步骤： • 骨髓涂片 • 样本处理 • 抗体孵育 • 染色 • 镜检

  8. CD68 CD3 CD20 CD10

  9. CD20+ 正常 CD20+患者 CD68+ 正常 CD68+ 患者

  10. MPO+ 患者 MPO+ 外周血片

  11. 流式细胞术

  12. cd10 – cd13

  13. cd16 – cd56 （NK）

  14. cd7 – cd2 T

  15. 白血病的免疫分型研究进展 一、诊断 • 质（80年代 静息的表达） • 量 CD分子表达的量多少 在某一分型中的不同量的表达对于治疗预后的意义

  16. 白血病的免疫分型研究进展 二、治疗 抗CD20抗体 美罗华 有效缓解B细胞白血病 启动介导B细胞溶解的免疫反应 可能机制： 补体依赖的细胞毒作用（CDC） 抗体依赖细胞的细胞毒作用（ADCC）

  17. 数据对比 • 《急性白血病细胞免疫表型分析及临床意义》——99例 • 《免疫分型在急性淋巴细胞白血病中的临床应用》——36例 • 《急性白血病细胞形态学与免疫学分型的关系》——2001到2005年 320例 瑞金医院拥有89年至今7000多例首发白血病例CD库，陈竺陈赛娟院士从中获取研究数据

  18. 从1989年7月到2007年12月底,共有7432例初发急性白血病病例的免疫标记.从1989年7月到2007年12月底,共有7432例初发急性白血病病例的免疫标记. • 其中髓系白血病5021例,B淋巴2012例,T淋巴399例. • 髓系中MPO表达89%,CD34表达35%,CD13表达42%,CD33表达38%,CD117表达41%. • B系中CD19表达99%,HLADR表达99.8%,CD20表达39%,CD22表达43%,CD10表达25%. • T系中CD3表达86%,CD7表达74%,CD5表达52%,CD2表达38% 积累的重要性！

  19. 探索血小板 第二部分

  20. 血小板 1.最小的血细胞 2.聚集成堆 3.内含紫红色颗粒 www.themegallery.com

  21. 血小板疾病分类 1 ITP的研究 2 目录 www.themegallery.com

  22. 血小板疾病的分类 • 数量改变 • 增多 原发性血小板增多症 • 减少 生成减少:巨大血小板性血小板减少症 破坏增加: ITP,TTP 分布异常:脾亢,稀释性血小板减少 www.themegallery.com

  23. 血小板疾病的分类 • 质量改变 • 遗传性 血小板无力症,巨大血小板综合征 • 获得性 白血病,MDS www.themegallery.com

  24. 他们为何满身乌青？ www.themegallery.com

  25. ITP

  26. 什么是ITP？ • 免疫性血小板减少性紫癜（immune thrombocytopenic purpura, ITP） • 与免疫反应相关的出血性疾病 • 严重血小板减少和急性淤斑等出血症状 • 无任何症状的轻、中度血小板减少 www.themegallery.com

  27. 分类 www.themegallery.com

  28. 发病率：1/10000 占总住院患者的0.18% 流行病调查 患者无年龄差异 儿童患者多为急性，男女无异 成人患者多为慢性，男:女约2.6~3.0:1 老年男女无异 流行病研究 www.themegallery.com

  29. 起病急骤，出现全身性皮肤、粘膜出血。 1 3～4％并发颅内出血 2 多有自限性，少数转为慢性 3 临床特点研究 • 急性ITP www.themegallery.com

  30. 30％－40％患者在诊断时无任何症状 1 一般起病缓慢或隐袭，常表现为不同程度的皮肤与粘膜出血，出血症状常呈持续性或反复发作 2 临床特点研究 • 慢性ITP www.themegallery.com

  31. 病因研究 • 病因未明 • 急性：上呼吸道感染 • 慢性：起病隐匿 www.themegallery.com

  32. 病因研究 • 研究的病毒 疱疹类病毒、麻疹病毒、人类微小病毒B19、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、EB病毒和肝炎病毒等 • 研究对象 • 研究方法 • 结果 • 讨论 www.themegallery.com

  33. 病因研究 • 研究的病毒 • 研究对象 6O例ITP住院确诊为ITP患儿，男36例，女24例；年龄3个月～13岁，平均为4.2岁，病前3一lO天均有上呼吸道感染史。 • 研究方法 • 结果 • 讨论 www.themegallery.com

  34. 病因研究 • 研究的病毒 • 研究对象 • 研究方法 清晨空腹采集患儿静脉血2ml于抗凝管内，用ELISA法检测患儿血清中的CMV—IgM、IgG、EBV—IgM、HSV—IgM、RSV—IgM、麻疹一IgM抗体等。 • 结果 • 讨论 www.themegallery.com

  35. 病因研究 • 研究的病毒 • 研究对象 • 研究方法 • 结果 (1)6O例患儿血清中检测出6种病毒抗体阳性25例，占41．7％ 。其中CMV—IgM、igG 10例，EBV—IgM 3例，风疹一IgM 4例，合胞一IgM 3例，Adv-一IgM 3例、麻疹抗体2例。 (2)60例中有7例属于慢性ITP，均未检测出病毒抗体。 • 讨论 www.themegallery.com

  36. 机制研究 • 主要发病机制： 针对血小板的自身抗体与血小板结合后导致单核一巨噬细胞系统(主要是脾脏)对血小板吞噬破坏增加，血小板寿命缩短。 www.themegallery.com

  37. 病毒感染 机体产生相应抗体 抗体与血小板膜 发生交叉反应 血小板膜 受到损伤 机制研究 血小板被单核一巨噬细胞系统清除 www.themegallery.com

  38. 机制研究 Phase 1 Phase 2 Phase 3 血小板易被单核一巨噬细胞系统吞噬和破坏 复合物附着于血小板表面 病毒感染后形成抗原－抗体复合物 www.themegallery.com

  39. 冻干人纤白蛋白微球 1.以白蛋白制成血小板类似的体积和形状 2.以Fg(人纤维蛋白原)包裹上述白蛋白微球 3.以这种微球模拟人体内已激活的表达有特殊蛋白及其与Fg形成的复合物

  40. 基因研究 • 目的 CD4+CD25+调节性T细胞(regulation T cell，Tr细胞)及相关基因Foxp3的表达. • 方法 • 结果 • 结论 www.themegallery.com

  41. 基因研究 • 目的 • 方法 外周血T细胞的分离,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Tr和RT-PCR测定Foxp3 mRNA的表达水平。 • 结果 • 结论 www.themegallery.com

  42. 基因研究 • 目的 • 方法 • 结果 • 1．ITP组外周血CD4+T、CD25+T和CD4+CD25+T细胞的百分率均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。 • 2．ITP组外周血T细胞Foxp3 mRNA的比值为(0.76±0.14)，对照组外周血T细胞Foxp3 mRNA的比值为(0.35±0.07)，差异有统计学意义(P<0.05)。 • 3．ITP组外周血CD4+CD25+Tr的数量变化与Foxp3 mRNA水平呈正相关(r=0.786，P<0.05)，而对照组则无 • 结论 www.themegallery.com

  43. 基因研究 • 目的 • 方法 • 结果 • 结论 • 转录因子Foxp3可特异表达于CD4+CD25+Tr细胞亚群上可认为Foxp3是调节CD4+CD25+Tr细胞发育的一个重要开关。 • ITP患儿体内Tr细胞的免疫抑制功能下降，细胞免疫失调，免疫耐受机制被打破，导致T、B细胞活化，引起患儿体内血小板的损伤。 www.themegallery.com

  44. 诊断 • 排除性诊断 (一) 多次化验血小板减少。 (二) 脾脏不大或轻度增大。 (三) 骨髓巨核细胞增多或正常，有成熟障碍。 (四) 以下五项中至少一项： 1. 肾上腺糖皮质激素治疗有效； 2. 脾切除治疗有效； 3. PAIg增多； 4. PAC3增多； 5. 血小板寿命缩短。 (五) 排除继发性血小板减少症。 www.themegallery.com

  45. 诊断 • 鉴别诊断 • 血小板生成障碍性疾病 • 其它血小板破坏增多的疾病 • 血小板消耗增多的疾病 www.themegallery.com

  46. Thank You ! 血液小组

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