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NUCLEÓTIDOS

ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO I: CONJUGACIÓN. NUCLEÓTIDOS. ATP, GTP. Molécula energética. AMPc , GMPc. Moléculas de señalización. Cofactores enzimático. NADH, NADPH. Ácidos nucleicos. Composición de los ácidos nucleícos.

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Presentation Transcript

  1. ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOSTRANSFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO I: CONJUGACIÓN

  2. NUCLEÓTIDOS ATP, GTP Molécula energética AMPc, GMPc Moléculas de señalización Cofactores enzimático NADH, NADPH Ácidos nucleicos

  3. Composición de los ácidos nucleícos

  4. Polímeros lineales de nucleótidos. Nucleótidos cuyos grupo fosfato unen las posiciones 3’ y 5’ de residuos de azúcar consecutivos. • Los fosfatos de estos polinucleótidos tienen carga negativa a pH fisiológico

  5. DNA

  6. RNA Estructura secundaria de RNA

  7. Dogma central de la Biología Celular

  8. Genética Bacteriana

  9. Antony van Leeuwenhoek (siglo XVII) Theodore Escherich 1886 Bacterium coli commune Enterobacteria of infants and their relation to digestion physiology

  10. Mutantes nutricionales Protótrofo Bacterias silvestres capaces de crecer en medios mínimos (iones, fuente de carbono y agua) sintetizando autónomamente todas las macromoléculas esenciales. Auxótrofo Bacterias generalmente mutantes incapaces de fabricar alguna molécula esencial y, por tanto, incapaces de crecer en medio mínimo.

  11. La recombinación genética ocurre en bacterias Recombinación genética, transferencia de información genética de un cromosoma a otro, afectando el genotipo celular. Transferencia horizontal y vertical de información genética

  12. Mecanismos de transferencia horizontal de material genético: Conjugación Transformación Transducción

  13. Descubrimiento de la conjugación Joshua Lederberg y Edward Tatum, 1946, E. coli met- bio- thr +leu +thi + met+ bio+ thr -leu -thi - ¿Mutación? ¿Transferencia nutrimental? ¿Sexo y recombinación? Protótrofos: consecuencia de recombinación genética; frecuencia 1/107

  14. Bernard Davis Transmission electron micrograph of conjugating E. coli. Contacto físico entre las células es esencial para la recombinación

  15. 1953, William Hayes F + / macho (DONANTE), Factor de fertilidad (plásmido F) Todas las células F+ F - / hembra (RECEPTORA) Interacción física: fase inicial del proceso de conjugación mediada por el pilus sexual o F

  16. Cruza EL FACTOR F: Unidad genética autónoma Es un elemento móvil. Es una molécula de DNA circular de doble cadena. Codifica alrededor de 40 genes, alrededor de 20 de ellos, están implicados en la transferencia de información génica incluyendo aquellos para la formación del pili sexual. También se le llama plásmido o episoma Todas las células F+

  17. CONJUGACIÓN

  18. CONJUGACIÓN BACTERIANA

  19. Células Hfr (high frecuency of recombination)Luca Cavalli F+ Hfr El plásmido F es un elemento génico que se replica independientemente del cromosoma bacteriano ó es capaz de integrarse y replicarse como parte del cromosoma bacteriano. Tasa de recombinación de 1/104

  20. Formación de una célula Hfr La célula Hfr mantiene su capacidad de conjugación por lo que puede conjugar con una célula F-

  21. From Masamichi Kohiyama, Sota Hiraga, Ivan Matic, and Miroslav Radman, “Bacterial Sex: Playing Voyeurs 50 Years Later,” Science 8 August 2003, p. 803,

  22. Cartografía cromosómica Conjugación interrumpida F-azistonslac-gal-strr Hfrazirtonrlac+gal+strs X 1957, Wollman y Jacob

  23. Conjugación bacteriana y recombinación

  24. El estado F´ y los merocigotos 1959, Edward Adelberg Hfr F´ Los plásmidos F´ también son transferidos por conjugación creando merocigotos o diploides parciales

  25. Transferencia de DNA cromosómico desde un plásmido F’

  26. Resumen conjugación

  27. Plásmidos • Moléculas de DNA extracromosómicos circulares. Los plásmidos o vectores se replican y transcriben de manera independiente del cromosoma bacteriano.

  28. Algunas características de los plásmidos: pBR322

  29. Tipos de plásmido de acuerdo al factor F • Plásmidos conjugativos contienen “tra-genes”, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia de plásmidos a otra bacteria. • Plásmidos “movilizables” sólo pueden transferirse en presencia de un plásmido conjugativo.

  30. Plasmido F

  31. Procedimiento experimental E. coliW3110/F´KmTn3 (Donadora) E. coli JM1452StrR (Receptora) X Tubo con 1 mL LB, 0.3 mL de JM y 0.12 mL de W3 Incubación a 37°C por 1 hora sin agitación. Caja petri LB con 2% estreptomicina E. coli W3110/F´KmTn3 E. coli JM1452Str Sembrado por estría Mezcla Incubación por 24 horas a 37 °C, refrigerar a 4 °C Parchar 50 colonias aisladas en LB con 1) Estreptomicina y 2) Kanamicina Incubar 24 h a 37 °C Observar y analizar resultados Reportar % de colonias transconjugantes

  32. Sembrado por estría

  33. Actividades para la siguiente semana

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