МАРКЕРЫ ТРОМБОЗА

1. МАРКЕРЫ ТРОМБОЗА Долгов Владимир Владимирович Кафедра клинической лабораторной диагностики, РМАПО Москва

2. Принцип контактного взаимодействия Эндотелиальный покров сосудов – гладкая текучая поверхность. Целостность эндотелия – основное условие несвертывания крови в сосудистом русле Субэндотелий организован полимерными белками: коллагеном, эластином, имеющими свойство твердого тела. Субэндотелий обладает выраженным тромбогенным эффектом

3. На поверхности неповреженной сосудистой стенки присутствует молекулярный слой гликокаликса, затрудняющий контакт клеток крови с мембранами клеток сосудов

4. При взятии крови в антикоагулянт не допускается стекание крови по коже пальца, по стенке пробирки и любой другой поверхности, так как мгновенно происходит контактная активация процесса свертывания. Кровь самотеком из прокола должна попадать прямо в антикоагулянт, перемешиваясь с ним.

5. Повреждение сосудов любой этиологии – путь к развитию тромбозов СЕПСИС САХАРНЫЙ ДИАБЕТ НАРУШЕНИЯ ГЕМОДИНАМИКИ СТРЕСС АТЕРОСКЛЕРОЗ

6. Важнейшие факторы и маркеры повреждения эндотелия и,следовательно, тромбообразования Социальные Молекулярные • Эндотелин • Гомоцистеин • С-реактивный белок • Ангиотензин II • Окись азота – NO • Фибронектин • Постоянное нервное перенапряжение • Гипертония • Курение • Гиперхолестеринемия • Сахарный диабет • Персистирующие инфекции

7. Тромбоцитарный тромб Тромбоцит Контактная активация Фаза освобождения Тробоцитарные факторы Тромбоцитарный тромб

8. PlateletFunction Analyzer PFA-100. Имитация первичного гемостаза Моделируется повреждение сосудистой стенки и образование тромбоцитарной пробки

9. Тромбоэластограф ROTEG. Оценивает стадии образования, стабилизации и лизиса сгустка цельной крови, имеет 4 параллельных канала, может быть использован для оценки влияний лекарственных препаратов на свертывание

10. Тромбоэластография Последовательные этапы формирования сгустка крови

11. Типичные примеры измененных тромбоэлпастограмм

12. Агрегация тромбоцитов, повреждение сосудистой стенки Тканевой тромбопластин XII VII XI VIII IX V X Xa Протромбин Тромбин Фибриноген Фибрин

13. Каскад усиления свертывания крови Традиционное представление об усилении сигнала в структуре плазменного гемостаза

14. Тромбоциты Накопление сигнала за счет обратных связей Слабый сигнал

15. Принцип обратной связи Принцип обратной связи на примере активации тромбином V и VIII факторов и инактивации Vа и VIIIа факторов гемостаза

16. Маркеры тромбообразования, ассоциированные с образованием тромбина

17. Маркеры активации гемостаза

18. Тромбин – ключевой фактор активации системы свертывания

19. По выходу фибрина нельзя судить о повышенном тромбогенном потенциале системы свертывания, т.к лишь часть тромбина идет на образование сгустка Функции активного тромбина

20. «Кинетика образования эндогенного тромбина» (TGA-анализ) – современный скрининг системы свертывания • Активность тромбина определяется интенсивностью флуоресценции продукта деградации синтетического субстрата, расщепляемого тромбином • Интенсивность флуоресценции достигает максимума, что соответствует максимальной активности тромбина, затем наблюдается процесс истощения активности

21. «Кинетика образования эндогенного тромбина» (TGA-анализ) – современный скрининг системы свертывания

22. CEVERON-ALPHA – универсальный автоматический анализатор открытого типа • CEVERON-ALPHA для 4 методов анализа: • - коагулометрияАЧТВ, ПВ, ТВ, Фибриноген, Протеин С, ВА, дефицит факторов свертывания, мутация Лейдена и другие. • - фотометрияС1-ингибитор, FVIII, Протеин С, АТ-III и другие. • - турбидиметрияД-димер, ВА, С-реактивный белок и другие. • - флуориметриякинетика образования эндогенного тромбина (для модификации Ceveron TGA) • Автомат CEVERON-ALPHA TGA позволяет проводить уникальный флуориметрический TGA-анализ • 360/430 нм • Длины волн фотометрического блока:405, 570, 630 и 740 нм • Скорость проведения анализов на CEVERON-ALPHA до 70 образцов/час (ПВ) (Стационар на 300-400 больных)

23. TGA-анализ – универсальный метод оценки тромбогенного потенциала гемостаза • Диагностика тромбофилий • Диагностика гемофилий • Мониторинг противо-гемофилийной терапии для пациентов с наличием ингибитора фактора VIII • Мониторинг антикоагулянтной терапии, направленной на ингибирование тромбина и фактора Xa(гепарин)

24. Активность тромбина в фактор-дефицитных плазмах

25. Результаты TGА-анализа для различных групп пациентов

26. Пул метаболитов фибриногена в норме

27. Пул метаболитов фибриногена при активном тромбообразовании

28. Маркеры активации гемостаза (фибринолиза)

29. Разные пулы ПДФ при деградации фибриногена и фибрина

30. Образование ПДФ из фибриногена

31. Формирование фибрина из фибриногена

32. Образование ПДФ (Д-димеров) из фибрина

33. Разные пулы ПДФ при деградации фибриногена и фибрина

34. ВЫСОКАЯ ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ D-ДИМЕРА (прогноз отсутствия тромбоза) • Обследованы 150 пациентов с подозрением на тромбоз глубоких вен бедра • Диагноз ТГВ поставлен после проведения флебографии

35. Сравнительная характеристика специфичности и чувствительности диагностики ДВС-синдрома Тест Больные с ДВС (кол-во положительных результатов) Больные без ДВС (кол-во положительных результатов) D-димеры ФП А ПДФ ПВ АЧТВ 93,7 % 89,5 % 83,7 % 20 % 48 % 20 % 13 % 40 %

36. Оперативность требуется притяжелых тромботических осложнениях, когда концентрация Д-димера может значительно изменяться в течение одного часа. От точности и своевременности результатов анализа зависят меры предупреждения тромбоэмболии и инфаркта Иммунохроматографический метод с использованием рефлектометра позволяет определять концентрацию Д-димера, начиная со 100 нг/мл. Пороговое значение чувствительности важно, поскольку концентрация >300 нг/мл уже говорит ориске тромботических осложнений. Количественный экспресс-метод для определения Д-Димера (5 минут)

37. Новые лабораторные тесты в диагностике тромбообразования

38. СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ И ТЕРПЕНИЕ