1 / 26

ДИАГНОСТИка НаследственныХ БОЛЕЗНЕЙ метаболизма у детей

ФГУ «Московский НИИ педиатрии и детской хирургии» Минздравсоцразвития. ДИАГНОСТИка НаследственныХ БОЛЕЗНЕЙ метаболизма у детей. И.С. Мамедов, И.В. Золкина, В.С. Сухоруков. Основные типы нарушений обмена веществ, определяемые методом MS/MS. Нарушения обмена отдельных аминокислот

vidal
Download Presentation

ДИАГНОСТИка НаследственныХ БОЛЕЗНЕЙ метаболизма у детей

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ФГУ «Московский НИИ педиатрии и детской хирургии» Минздравсоцразвития ДИАГНОСТИка НаследственныХ БОЛЕЗНЕЙ метаболизма у детей И.С. Мамедов, И.В. Золкина, В.С. Сухоруков

  2. Основные типы нарушений обмена веществ, определяемые методом MS/MS • Нарушения обмена отдельных аминокислот • Нарушения обмена органических кислот • Нарушения окисления жирных кислот В качестве основных маркеров заболеваний используются концентрации аминокислот и ацилкарнитинов с различными заместителями

  3. Нарушения обмена отдельных аминокислоти основные маркеры заболеваний

  4. Нарушения обмена органических кислот и основные маркеры заболеваний.

  5. Нарушения обмена жирных кислот

  6. Отборобразцовкрови

  7. Кровь собирается на стандартную карточку-фильтр (№903Whatman), который применяют для скрининга новорожденных на ФКУ. • Кровь может быть как капиллярная (из пальца, пятки), так и венозная. • Необходимо хорошо пропитать выделенную область на фильтре! • На карточке-фильтре обязательно должно быть четко указаны ФИО, кем и откуда направлен пациент, дата рождения и телефон лечащего врача. • Образец высушивается 2-3 часа на воздухе. Желательно приложить выписку из истории болезни.

  8. Этапы пробоподготовки • Экстракция • Упаривание • Дериватизация

  9. Экстракция определяемых компонентов

  10. Упаривание и дериватизация пробы

  11. Дериватизация аминокислот и ацилкарнитинов Bu = бутил аминокислота R’ = H или ацил Bu = бутил Карнитин или ацилкарнитин

  12. QQQ Agilent

  13. Схема ТМС Газ аргон Ячейка соударений MS2 MS1 Products Precursor

  14. MS/MS в пространстве N2 Inlet Q3 RFIon Guide Q1 Q2Collision Cell Detector MS/MS во времени • Все ионы из источника • поступают в ловушку • ионы вещества • ионы фона Детектор Типы масс-анализаторов

  15. МЕТОДЫ ИОНИЗАЦИИ ИАД (ЭС,ХИАД,ФИАД) API (ESI, APCI, APPI) Химическая ионизация (CI) Бомбардировка Быстрыми атомами (FAB) Электронная ионизация (EI) Жесткая ионизация, сильная фрагментация Мягкая ионизация, низкая фрагментация

  16. Преимущества метода тандемной масс-спектрометрии: • повышенная диагностическая чувствительность и специфичность; • получение структурной информации об изучаемых молекулах; • высокая скорость анализа (42 вещества за 3 минуты) • высокая селективность анализа в сложных многокомпонентных смесях • низкая себестоимость анализа

  17. Масс – спектр образца крови

  18. Пример типичной хроматограммы биологического образца

  19. Параметры метода анализа хроматограмм

  20. Масс-спектр пробы с повышенным содержанием ацилкарнитинов

  21. Масс-спектр пробы с повышенным содержанием аминокислот

  22. Обработка массива результатов анализа при помощи программного обеспечения MassHunter

  23. Индивидуальный отчет, выдаваемый программой жидкостного хромато-масс-спектрометра

  24. Сравнение фенилкетонурии и нормы d3-Leu Normal d5-Phe Leu d4-Ala Phe Ala d6-Tyr Tyr d3-Met Met Phe PKU Увеличение пика фенилаланина

  25. Normal 100 C16 carnitine % C3 carnitine 0 MCAD Deficiency C8 carnitine 100 % C6 carnitine C10:1 carnitine 0 m/z 225 250 275 300 325 350 375 400 425 450 475 500 Сравнение нормы и дефицита среднецепочечногоацилкарнитина

  26. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Применение новых высокотехнологичных методов лабораторной диагностики наследственных болезней метаболизма позволяет облегчить и ускорить трудный путь практического врача к правильному диагнозу.

More Related