N -(2-hydroxypropyl)meta k rylamid (HPMA)

1. Využití “Fluorescence Lifetime Microscopy” pro analýzu intracelulární lokalizace polymerních terapeutik nesoucích doxorubicin Hovorka Ondřeja, Šubr Vladimírb,Větvička David a, Kovář Lubomíra, Strohalm Jiříb, Strohalm Martina , Benda Aleš c,Hof Martinc, Ulbrich Karelb, Říhová Blankaa a Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i, Vídeňská 1083, 142 20, Praha 4 b Ústav Makromolekulární Chemie, AVČR v.v.i, Heyrovskéhonám. 2, 162 06, Praha6 cÚstav Fyzikální Chemie J. Heyrovského, AVČR, v.v.i., Dolejškova 2155/3, 182 23 Praha 8

2. N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA)

3. N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA) doxorubicin λex = 540nm, λem 612

4. N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA) doxorubicin λex = 510nm, λem590 MW = 20kDa

5. Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem jaderná membrána

6. Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem jaderná membrána membrána andozómů

7. Intracelulární lokalizace doxorubicinu po inkubaci buněk s polymerním konjugátem jaderná membrána membrána andozómů Golgiho aparát

8. 7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone

9. 7,8-dehydro-9,10-desacetyldoxorubicinone

10. Emisní spektra doxorubicinu a D* při 488nm excitaci ve vodě kvantový výtěžek D* je 10-20 vyšší v závislosti na prostředí……

11. doxorubicin D*

12. spektrální unmixing směsi Dox + D* (5:1) založený na naměřených spektrech

13. spektrální analýza polymerního konjugátu spektrální unmixing založený na naměřených spektrech

16. Doxorubicin D*

17. stanovené hodnoty „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v roztoku bez buněk a v médiu zbaveném buněk

18. distribuce hodnot „fluorescence lifetime“ pro Dox, D* a polymerní konjugát v buněčné kultuře

19. doxorubicin D* Dox+D* (5:1) HPMA-Dox [ns]

20. ZÁVĚR FLIM je technika která umožní oddělit i fluorochromy, jejichž emisní spektrální charakteristika se výrazně překrývá a algorytmy pro spektrální unmixing v takových případech selhávají Stanovili jsme lifetime pro Dox, D* a polymerní konjugát a podařilo se nám upřesnit a potvrdit jeho intracelulární distribuci.

21. Ústav Makromolekulární Chemie, AVČR v.v.i, Mikrobiologický ústav, AVČR v.v.i, Ústav Fyzikální Chemie J. Heyrovského , AVČR, v.v.i., Hovorka O. Cimburek Z. Větvička D. Kovář L. Strohalm M. Říhová B. Benda A. Hof M. Šubr V. Strohalm J. Ulbrich K.