1 / 13

细胞融合技术

细胞融合技术. 一、实验目的. 1. 通过 PEG 介导的鸡血细胞融合实验 , 对体细胞融合有一个清楚的概念 2. 初步掌握利用 PEG 介导动物细胞融合的实验技术. 二、实验原理. 细胞融合 (cell fusion) 或细胞杂交 (cell hybridization) 是指真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

wendy-donovan
Download Presentation

细胞融合技术

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 细胞融合技术

  2. 一、实验目的 1.通过PEG介导的鸡血细胞融合实验, 对体细胞融合有一个清楚的概念 2. 初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术

  3. 二、实验原理 细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)是指真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。 目前, 诱导细胞融合的方法有三种：病毒(Okada, 1958)、聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)(Pontecorvo, 1975)和电激(Zimermann, 1980s)。

  4. 利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通, 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。

  5. 影响PEG介导细胞融合的因素: • PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓度一般为40~60%。 • PEG的pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。 • PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至数分钟。 • 4. 融合时的温度: 由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。因此，为了获得更好的融合效果, 在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细, 一般采用的温度为38~40℃。

  6. 三、实验用品 1 ．器材:普通离心机、普通光学显微镜、 100ml量 筒2个, 滴管10支, 10ml刻度离心管20支, 载、盖片各20片 2 ．材料:新鲜鸡血 3 ．试剂: Alsever液、0.85%生理盐水液、GKN 液、50% PEG液

  7. 四、实验方法 细胞融合----化学法

  8. 细胞融合方法 将Alsever液与活鸡翼下鸡血混成1:4悬液 4度冰箱保存 取上述悬液加入生理盐水混匀 1200r/min离心5分钟

  9. 弃上清 上述离心速率重复离心两次 弃上清 加入适量GKN液，配成细胞悬液 加入 50%的PEG液混匀 分别在5min、15min、20min观察细胞融合 吸取1~2滴镜检并计算出融合率

  10. 细胞融合

  11. 四、作业与思考 简述细胞融合的原理。

  12. 附: 1. Alsever液制备:葡萄糖(Glucose) 2.05g,枸椽酸钠 0.8g,氯化钠(NaCl) 0.42g,重蒸水 至100ml 2. 0.85%生理盐水液 3. GKN液:氯化钠 8g,氯化钾(KCl)0.4g, Na2HPO4•2H2O1.77g,NaH2PO4•H2O 0.69g,葡萄糖 2g,酚红(phenolred) 0.01g,溶于1000ml重蒸水中 4. 50% PEG液 (现用现配):根据实验需要，称取适量PEG(Mr.4000)放入刻度离心管内，在酒精灯上将其加热熔化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热至50℃的GKN液并充分混匀。

More Related