精液和前列腺液的检验

1. 精液和前列腺液的检验 • 内蒙古民族大学 • 赵文海

2. 精液和前列腺液的检验 • 要 求： 　１.了解精液、前列腺液的含义、成分、标本的采集、检验项目及目的。 2.熟悉精液、前列腺液常规检验的项目、方法及临床意义。 临床应用： 1、评估男性的生育功能，用于不孕症的诊断和疗效观察。 2、辅助诊断男性生殖系统疾病。 3、输精管结扎术的疗效观察。 4、计划生育科研工作。 5、为体外授精（in vitro fertilization）和精子库(sperm bank)筛选优质精子。 6、用于法医学鉴定等。

3. 第一节　精液检验 • 一.精液检验标本采集 （一）采集方法 　１.手淫法 　２.体外排精法 （二）注意事项 　１.标本采集的时机：禁欲3－5天采集，超过5天使精液量增加，精子活力下降。 　２.标本采集的次数：应间隔1－2W检查一次，连续检查2－3次。 　３.标本转运：标本盛于清洁干燥的塑料试管内加盖送检，并注意保温。 　４.不完整的精液标本不宜进行精液分析

4. 二、精液常规检验 • 主要项目：理学检查（颜色、量、液化时间、粘稠度、ＰＨ）；镜检（精子活率、精子活力、精子密度、精子形态检查、其它细胞、病原体等）。

5. （一）理学检查 １．外观和气味 　正常刚射出的精液有一股腥味，呈乳白色或灰白色． ２．精液量：2－5ml/次，少于1ml，大于8ml均为异常。减少：占不孕症的22％，主要见于前列腺和精囊病变、射精管阻塞，先天性精囊缺如等；增多：精子被稀释，占不孕症的5％，此可因垂体前叶促性腺激素的分泌功能亢进，使雄性激素分泌量增多所致，若不射精，称为无精液症。 ３．精液液化：精液离体后5－10分钟开始液化，30min完全液化，超过1h仍不液化和液化不全者均为异常，原因：抑制精子活力，从而减少受孕机会。可能是由于前列腺分泌液化因子减少，导致蛋白水解酶缺乏和前列腺炎症时破坏了蛋白水解酶而引起。疾病：输精管缺乏或先天性精囊缺如等。 ４．精子粘稠度（1）直接玻棒法:3级. Ⅰ级:30min基本液化,细粘液丝; Ⅱ级:60min不液化,粗大粘液丝; Ⅲ级:24h不液化,无粘液丝; （2）粘度计法:0.725：36.1±13.4S; 0.625：41.2±11.4S ５．ＰＨ：7.2-7.8

6. （二）显微镜检查 方法:涂片加盖玻片镜检. 精子缺乏和无精子症: １精子活率分析 １）精子活动率检查 　精子活动率（％）＝活动精子数／（活动精子数＋不活动精子数）*１００ 正常参考值:精子活率≥75% 临床意义:男性不孕症的诊断.现认为只要精子活率≥45%,即使精子数∠0.5*109/L，仍能受孕。 ２）精子活动力检查：指精子前向运动的能力。WHO分型：4级。 a级 精子呈高速直线运动。 b级 活动较好，精子呈中速直线运动。 c级 活动不良，活动迟钝，原地转动。 d级 不活动，死精子。

7. 其运动与温度有关，最适温度为：37℃ 正常参考值：射精后60min内：a级≥25％或a级＋b级≥50％ 临床意义：男性不孕症的诊断.精子活动力∠40%,且以c级活动力精子为主，可能是不孕症的原因之一。疾病：①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②生殖系统非感染性疾病③应用抗代谢药、抗疟药、雌激素、氧化氮芥等。　 ２．精子密度与精子总数检查 精子密度（精子浓度）：是指单位体积内的精子数，乘以一次射精量，即为1次射精的精子总数。 １）粗略估计法

8. ２）精子计数 　原理 　试剂 　操作 　计算　精子数／Ｌ＝５个中方格的精子数×稀释倍数×５×１０×１０６ 　精子总数：精子密度×精液量 正常参考值：精子总数≥40×106/次；精子浓度： （50－100）×109/L。 临床意义：疾病：①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②先天性、后天性睾丸疾病：睾丸畸形、萎缩、结核、淋病、炎症等；③输精管或精囊缺如；④重金属的损害：pb、镉中毒⑤放射性损害；⑥应用抗癌药和长期应用棉酚等；⑦50岁以上的老年人。　

9. ３.精子形态学检查 方法：涂片、固定、染色、镜检。 　①正常精子（见图） 　②异常精子（见图） 　③未成熟的生殖细胞（见示意图） 　４.其他细胞：ＲＢＣ、ＷＢＣ、肿瘤Ｃ

38. 正常参考值：正常形态精子为：82－94％ • 临床意义：精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。 • （1）、生殖系统的非特异性感染，可致尖头和其他不规则精子比例增加。 • （2）、精索静脉曲张：可引起精子头、体部肿胀、缺陷。 • （3）、药物中毒：如：呋喃类、烷基化合物、激素、安体舒通、5－羟色胺、单胺氧化酶抑制剂、环磷酰胺、甲胺蝶呤、以及大剂量的阿司匹林等，精液会出现未成熟的精子。 • （4）、工业废物与环境污染：pb、砷、放射性污染等，可致精子畸形和或数量减少。

39. 三.精子穿透试验 １.体内穿透试验 ２.体外穿透试验

40. (一)体内穿透实验：又称性交后实验（PCT）。 • 方法：在排卵期或近排卵期性交后数小时，检查宫颈口粘液和精子数量、活率及活力，从而评价精子穿透宫颈口粘液的能力。 • 正常参考值：性交4－6h后，可见正常活动度精子数› 25个/HP；6－8h后，可见正常活动度精子数›70个/HP • 临床意义：如宫颈粘液中存在抗精子抗体或精子表面结合有抗精子抗体，精子将出现凝集现象；精子本身若有遗传或代谢障碍、逆行射精等，精子也不能穿透宫颈粘液；宫颈粘液异常，如宫颈疾病（炎症、粘连、囊肿等）所致、或粘液粘滞度大、酸性粘液、脓性粘液等，均可导致本试验异常。

41. （二）体外穿透试验： • 1、精子－宫颈粘液玻片穿透试验：是在玻片上观察精子对宫颈粘液的穿透力。 • 方法：在一片洁净的玻片上相约4mm处，分别滴排卵期的宫颈粘液和液化的精液1滴，轻轻加上盖玻片，使两液滴慢慢接触而形成交界面，然后置于37度孵育10－15min，取出镜检。以紧临界面的第一个HP设为F1，紧靠F1的第二个视野为F2，分别记录F1和F2中活动的精子数。 • 结果判断（1）正常：精子穿透粘液，并90％以上精子呈直线运动。（2）较差：精子能穿透粘液，但运动距离小，离开粘液与精液界面∠500µm。（3）异常：精子穿透粘液后，很快失去活力或仅有摆动。（4）异常：精子不能穿透以上界面或于界面精液侧出现凝集。 • 正常参考值：精子穿透粘液，且90％以上精子呈直线运动。 • 临床意义：不孕症，并结合其他检查综合分析结果。

42. 2、精子－粘液接触试验（SCMC）： • 在精子与宫颈粘液接触后，观察精子的运动功能是否受损害及损害程度。 • 方法：取精液及近排卵期宫颈粘液等量混合，在室温下静止30min，观察并计数非正常运动精子的出现率，以未与宫颈粘液混合的精液作对照，求出摆动精子的出现率（％）。摆动精子越多，意味着受损越严重。此外，还可以其他供者的精液或宫颈粘液分别进行交叉试验，以确保抗精子抗体是来自精液或宫颈粘液。 • 正常参考值：阴性（精子摆动出现率0－25％） • 临床意义：不孕症，阳性提示精子或宫颈粘液中存在抗精子抗体。

43. 3、仓鼠卵－精子穿透试验：又称精子穿透试验（SPT）是评价精子功能最常用的试验。 SPT是检测精子获能、顶体反应和结合卵子能力的一种技术复杂而严格的生物学试验。 • 方法：用相差显微镜观察，计算卵子受精率和受精指数（FI） • 计算公式：受精率＝受精卵数/卵细胞总数*100％；FI＝穿透卵细胞的精子数/卵细胞总数 • 正常参考值：受精率≥10％，受精指数（FI） ≥5 • 临床意义：受精指数（FI） ∠5，示生育力下降。与以上其他试验结果有良好的相关性。 • 对不孕症的诊断符合率达90％，可作为不孕症的诊断依据，还可用于评价人工授精试验的依据，但试验影响因素很多，注意进行质量控制。

44. 4、精子低渗肿胀试验（HOS）：是观察精子在低渗溶液中的变化情况，。4、精子低渗肿胀试验（HOS）：是观察精子在低渗溶液中的变化情况，。 • 方法：将精子置入低渗溶液中，由于低渗作用，精子尾部可肿胀、弯曲。用相差显微镜进行观察，计算100－200个精子，计算出肿胀精子的％。 • 结果判断：a型:未出现肿胀；b型：尾尖出现肿胀；C型：尾尖出现弯曲、肿胀；d型：尾尖肿胀伴弯曲、肿胀；e型：尾弯曲、肿胀；f型：尾粗短、肿胀；g型：全尾部肿胀。 • 正常参考值：g型肿胀精子率›50％ • 临床意义：HOS试验可以预测精子膜有无损害，常用来判断精液中是否存在AsAb。有人认为， HOS试验中精子形态与游离自由基被超氧化物歧化酶破坏有关。

45. 四.化学检查 精液中某些生化指标的改变对男性病的诊断及治疗有重要的意义．如ＡＣＰ、ＬＤＨ－Ｘ、精子顶体酶、Zn、精浆柠檬酸、精浆果糖等。

46. 1.酸性磷酸酶（ACP）：主要来自前列腺，属于前列腺酸性磷酸酶（PAP）1.酸性磷酸酶（ACP）：主要来自前列腺，属于前列腺酸性磷酸酶（PAP） • 正常参考值（1）速率法：80－1000U/ml （2）β－硝基酚法：›200/UL • 临床意义：用以了解前列腺的功能和对前列腺疾病的诊断。减低：前列腺炎症；增加：前列腺癌和前列腺肥大等； 精子PAP活性减低，受孕的几率也减低。 • 2。乳酸脱氢酶－X（LDH－X）：精液共有6种乳酸脱氢酶，以乳酸脱氢酶－X的活性最强，相当于乳酸脱氢酶总活性的1/3，广泛存在于精母细胞、精子细胞、和精子线粒体内，具有组织特异性，对精子生成、代谢、获能和受精均具有重要作用。 • 方法：电泳分离扫描 • 正常参考值（1） LDH－X相对活性≥40％，绝对活度（1430±940）U/L • 临床意义：活性减低或消失：见于睾丸组织萎缩；少精或无精症患者。有时精液常规检查正常的不孕症患者，也可出现LDH－X活性下降，因此， LDH－X活性检测对男性不孕症的诊断是一项有价值的指标。

47. 3。精子顶体酶（acrosin）的测定：精子形成的早期就有丰富的顶体酶原mRNA表达，当精子头部进入卵透明带，精子体外获能，顶体酶原活化，从而启动肽链相互作用，促进顶体反应发生。3。精子顶体酶（acrosin）的测定：精子形成的早期就有丰富的顶体酶原mRNA表达，当精子头部进入卵透明带，精子体外获能，顶体酶原活化，从而启动肽链相互作用，促进顶体反应发生。 • 方法：速率法 • 正常参考值（37±21）U/L • 临床意义：顶体酶活性降低：不孕症；与精子活力、活率正相关，与精子畸形、WBC等副相关。 • 4。精浆柠檬酸测定：主要来自前列腺，其作用主要是络合钙离子，从而调节精浆中钙离子的浓度，与射精后精液凝固及液化过程密切相关。 • 方法：紫外比色法 • 正常参考值：50μmol/L • 临床意义：用以评价前列腺功能和判断雄激素的分泌状态。

48. 5.精浆果糖：精浆果糖是精子能量的主要来源，是由精囊腺分泌的。精浆果糖的高低直接影响精子活力，同时睾酮的水平也影响精囊果糖的分泌。因此，精浆果糖的含量测定不仅能反应精囊腺的分泌功能，而且还反应睾丸内分泌功能。5.精浆果糖：精浆果糖是精子能量的主要来源，是由精囊腺分泌的。精浆果糖的高低直接影响精子活力，同时睾酮的水平也影响精囊果糖的分泌。因此，精浆果糖的含量测定不仅能反应精囊腺的分泌功能，而且还反应睾丸内分泌功能。 • 方法：显色法和紫外分光酶分析法 • 正常参考值：间苯二酚法：9.11－17.67mmol/L；吲哚比色法： ≥13 μmol/L • 临床意义：精浆果糖为零时，见于先天性两侧输精管和/或精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行射精；精浆果糖降低：精囊炎和雄激素分泌不足等。 • 6.精浆锌：为了维持人体生殖内分泌系统的功能，需要锌、锰、镁、铁、钾、钠等多种金属元素的参与，期中锌与生殖功能关系最为密切。精浆中的锌比血液中的锌高，主要存在于睾丸、副睾和前列腺中。 • 方法：原子吸收光谱法和比色法 • 正常参考值：原子吸收光谱法：163.02±45.26 μg/ml；比色法： ≥2.4 μmol/1次射精 • 临床意义：用于不孕症的诊断，减少或缺乏：可（1）抑制脑垂体促性腺激素的释放，影响性腺发育及性腺的生殖和内分泌功能；（2）影响精子生成、成熟、激活和获能过程。

50. 五.免疫学检查 近年来免疫学检查迅速发展，如： 　１.抗精子抗体（AsAb）： 　①混合抗免疫球蛋白试验（MAR） 　②免疫珠试验 　③精子凝集试验 　２.精浆免疫抑制物质 　３.精浆免疫球蛋白测定