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非典型肺炎”元凶冠状病毒图. 第十章 植物病毒. 病毒( Virus )是一组(一种或一种以上) DNA 或 RNA 核酸分子,包围在蛋白或脂蛋白外壳内,在合适的寄主细胞借助于寄主蛋白合成体系、物质和能量完成复制 ,伴随核酸突变发生变异。 寄生植物的称为植物病毒( plant virus ), 寄生动物的称为动物病毒 (animal virus) 寄生细菌的称为噬菌体( bacteriophage )。. 简要发展史 发现: 天花;公元 10 世纪(北宋),人工免疫预防天花(中国); 1798 ,英国人 Edward Jenner 发明牛痘疫苗。 700 年。.
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第十章 植物病毒 • 病毒(Virus)是一组(一种或一种以上)DNA或RNA核酸分子,包围在蛋白或脂蛋白外壳内,在合适的寄主细胞借助于寄主蛋白合成体系、物质和能量完成复制 ,伴随核酸突变发生变异。 • 寄生植物的称为植物病毒(plant virus), • 寄生动物的称为动物病毒(animal virus) • 寄生细菌的称为噬菌体(bacteriophage)。
简要发展史 发现: 天花;公元10世纪(北宋),人工免疫预防天花(中国);1798,英国人Edward Jenner发明牛痘疫苗。700年。
1576 荷兰人Charles de Lieclase描述郁金香杂色花。“郁金香热” 一株郁金香(球根):数头牛、猪、绵羊;几顿谷物;上千磅奶酪;一个磨坊;
1886 Mayer, 传毒实验(TMV) 1892 Ivanovski (俄) 发现TMV的致病因子能穿过细菌过滤器。 1898 Beijerinch(荷兰),病毒学之父,提出病原不是细菌,而是“可过滤性病毒” 1935 Stanley TMV蛋白结晶,获诺贝尔奖。
目前已研究和命名的植物病毒达1000多种,其中许多为重要的农作物病原,其所造成的损失仅次于真菌病害。 水稻东格鲁病(Rice tungro)在东南亚一些国家是最具有毁灭性的病毒病,上世纪中期仅菲律宾每年因此病所致的稻谷损失即达140万吨; 水稻矮缩病(Rice dwarf)于19世纪末在日本一些地区流行,曾因此饿死1万多人;
在我国北方麦区间歇性暴发的小麦黄矮病(Barley yellow dwarf)平均造成30%的产量损失。在油菜上,因病毒病造成的产量损失常年达20~30%。 甜菜曲顶病(Beet curly top)、香蕉束顶病(Banana bunchy top)等几乎对一些产区造成了毁灭性打击。
由于分子生物学的发展和电子显微镜的进步,对植物病毒的形态、结构、生物学特性及理化特性都有深入的研究。近年来对植物病毒的研究已进入分子水平,内容包括基因组结构及功能、侵染、增殖、致病过程的分子机制以及抗病毒基因工程等。由于分子生物学的发展和电子显微镜的进步,对植物病毒的形态、结构、生物学特性及理化特性都有深入的研究。近年来对植物病毒的研究已进入分子水平,内容包括基因组结构及功能、侵染、增殖、致病过程的分子机制以及抗病毒基因工程等。
第一节 植物病毒的一般性状 一、植物病毒的形态 植物病毒粒体很小,在电子显微镜下才能观察到;其度量单位为纳米( nm)。大多数植物病毒粒体为球状、杆状和线状,少数为弹状、杆菌状和双联体状等;还有些病毒呈丝线状,柔软不定形。
许多植物病毒由不只一种粒体构成。 烟草脆裂病毒有两种杆状粒体,长的一种为195×25 nm,短的一种为43~110×25 nm; 苜蓿花叶病毒有5种粒体组分:大小为58×18、54×18、42×18、30×18、18×10 nm。
一些球状病毒也有多种粒体组分,但这些粒体形态相同,只是其中所包含的核酸含量不同而重量存在差异。一些球状病毒也有多种粒体组分,但这些粒体形态相同,只是其中所包含的核酸含量不同而重量存在差异。 这些病毒被称为多分体病毒(multicomponent virus),必需有多种病毒粒体组分同时侵染寄主细胞,才能增殖并完成其生物学功能。
二、病毒的结构 植物病毒主要含有核酸和蛋白两大部分。中间为核酸芯,外部有外壳蛋白包被形成衣壳,少数病毒在蛋白衣壳外面还包被一层脂膜,称为包膜病毒。
杆状或线状病毒,蛋白质亚基螺旋状排列,中间是一个由核酸构成的空心管子,核酸也呈螺旋状排列,嵌入到螺旋状排列的蛋白质亚基内端。 如,TMV杆状粒体。
2130亚基;16 1/3亚基/圈,3圈一个周期,49个亚基;亚基——核苷酸,1——3;
球状病毒,蛋白质亚基镶嵌在粒体表面,构成多面体形,内心是病毒的核酸;球状病毒并非光滑的球体,而是多面体(多为二十面体),多个正三角形组合而成。
三、病毒组分及其生物学功能 植物病毒的主要成份是核酸和蛋白质,有些还含有少量的金属离子、多胺和水等。 (一)核酸 植物病毒粒体中的核酸主要是其基因组,有些含mRNA。病毒基因组携带了病毒的全部遗传信息,决定病毒的增殖、生物学特性及致病性等。 植物病毒基因组所包含的基因数目从一个至十二个,分子量从0.4×106d到15.5×106d,通常具有外壳蛋白基因、复制酶基因及运动蛋白基因等。大部分植物病毒基因组能编码4~7种蛋白质。
植物病毒的基因组多数为核糖核酸(RNA),少数为脱氧核糖核酸(DNA)。根据核酸性质及功能,可将植物病毒基因组分为下列5种类型: 1.正单链RNA(+ssRNA) 单链RNA具有侵染性,可以直接翻译,起mRNA的作用。大部分重要植物病毒的基因组属这一类型。 70%,TMV,CMV,PVY; 多分体病毒。
2.负单链RNA(-ssRNA) 病毒粒体中的单链RNA不具侵染性,必需先转录成互补链,才能翻译蛋白。植物弹状病毒的基因组属这一类型。如小麦丛矮病。 3.双链RNA(dsRNA) 其中一条链具有mRNA的作用。负链变正链才能作为mRNA。植物呼肠孤病毒的基因组属这一类型。 水稻矮缩病。
4.单链DNA(ssDNA) 联体病毒科(Geminiviridae)病毒含有这种类型基因组,复制时单链DNA先合成双链DNA,再以常规途径转录生成mRNA。 5.双链DNA(dsDNA) 核酸类型与高等动、植物的相同,为互补的双链DNA,花椰菜花叶病毒属(Caulimovirus)、杆状DNA病毒属(Badnavirus)具有这种类型基因组。
(二)蛋白质 植物病毒的基因组很小,编码的蛋白质种类也很少,按照其功能可分为结构蛋白和非结构蛋白。 结构蛋白是构成一个完整病毒粒体所需要的蛋白,主要是外壳蛋白(coat protein,CP)和囊膜蛋白,有些病毒还有基因组结合蛋白(VPg),由于大多数植物病毒没有囊膜,其结构蛋白也就只有外壳蛋白。而且绝大多数植物病毒的外壳蛋白仅由一种蛋白多肽构成,个别的有两种以上。
第二节 植物病毒的侵染和传播 一、植物病毒的侵染和复制 大多数植物病毒是从机械的或传毒介体所造成的微伤(fine wound)侵入寄主,少数经过内吞(endocytosis)作用,包膜病毒通过融合(fusion)方式进入寄主细胞。 植物病毒没有细胞结构,不像大多数生物那样具有复杂的繁殖器官进行有性或无性繁殖,也不像细菌那样进行裂殖生长,而是分别合成核酸和蛋白质再组装成子代病毒粒体。这种特殊的繁殖方式称为复制。
病毒侵染植物后,在活细胞内增殖后代需要两个步骤,一是病毒核酸的复制(replication),即病毒的基因传递;二是病毒基因的表达(gene expression),即病毒蛋白质合成。一般新增殖的病毒会在体内进行胞间运转和长距离运转。
植物病毒核酸的复制 大部分植物病毒的核酸复制是由RNA到RNA。病毒核酸的复制需要寄主提供复制的场所(通常是在细胞质或细胞核内)、复制所需的原料和能量、部分寄主编码的酶及膜系统。病毒自身提供的主要是模板和专化的聚合酶,即复制酶。花椰菜花叶病毒编码一种依赖于RNA的DNA聚合酶,也称反转录酶。
根据核酸种类和性质不同,植物病毒复制可分为多种类型。根据核酸种类和性质不同,植物病毒复制可分为多种类型。 以(+)RNA病毒为例,病毒的复制过程如下: (1)病毒粒体进入寄主细胞,脱壳,释放RNA; (2)RNA与核糖体结合,翻译出病毒复制酶等与复制相关的基因产物; (3)复制酶以(+)RNA为模板合成(-)RNA链,并形成双链复制型; (4)从复制型产生子代(+)RNA链; (5)以病毒RNA为模板合成外壳蛋白; (6)外壳蛋白亚基和RNA组装成新的病毒粒体。
病毒在复制过程中会产生一定形状的内含体(inclusion body),可在光学显微镜下看到。 在细胞核内,称为核内含体; 在细胞质内,称为细胞质内含体。 不定形内含体是由病毒粒体和寄主细胞成份混合组成的; 晶体状内含体一般是由病毒粒体整齐排列堆叠而成。
二、病毒在植物体内的运转 在植物叶肉细胞间的移动称为胞间运转; 经维管束输导组织的运转称为长距离运转。
(一)胞间运转 已知植物病毒的胞间运转有多种途径,而以经胞间连丝的运转最为普遍。 该过程需有病毒的运动蛋白参与。 首先运动蛋白作用于胞间连丝,使胞间连丝的孔径增大几倍至几十倍;同时运动蛋白与病毒核酸结合,使核酸呈细长的线状;最后病毒是以核酸的形式通过扩展了的胞间连丝进入相邻的细胞。
一些病毒仅能在某些寄主的接种点附近有限的细胞内扩散,表现为局部侵染。一些病毒仅能在某些寄主的接种点附近有限的细胞内扩散,表现为局部侵染。 • 一些病毒为韧皮部限制病毒(phloem-limited virus),即病毒经介体传入寄主韧皮部后,仅能在韧皮部增殖和运转。 • 病毒在细胞间移动的速度是缓慢的,平均每天不过1mm左右。
(二)长距离运转 植物病毒的侵染大都是系统性的; 先在薄壁细胞组织中增殖和运转; 然后进入维管束组织的韧皮部或木质部很快地运转。
(三)病毒在植物体内的分布 全株性侵染的病毒并不是植株的每个部分都有病毒,如只有部分病毒可以进入植株的种胚,所以病毒可以由种子传染的还是少数。 有少数病毒可以进入花粉,花粉就可以传染这些病毒。
植物旺盛生长的分生组织很少含有病毒,如茎尖、根尖。因此切下茎端小段(0.1-0.25cm)分生组织培养,可以得到无病毒的植株。植物旺盛生长的分生组织很少含有病毒,如茎尖、根尖。因此切下茎端小段(0.1-0.25cm)分生组织培养,可以得到无病毒的植株。 马铃薯、大理菊、草莓等营养繁殖的作物,采用分生组织培养的方法,可以从病株上得到无毒苗。 分生组织培养不一定都能得到无毒苗,要经过反复测定确定不带病毒后,再用于繁殖无性系。
三、植物病毒的传播 植物病毒为专性寄生物,不能离开活细胞。 植物病毒传播方式可以分为介体传播和非介体传播。
(一)植物病毒的介体传播 1.昆虫介体 植物病毒自然传播的主要途径。其中,同翅目昆虫占70%以上,主要为蚜虫、叶蝉、飞虱类。 按照介体与植物病毒之间的生物学关系,可分为非持久性病毒(nonpersistent virus)、半持久性病毒(semipersistent virus)和持久性病毒(persistent virus)三种类型。
⑴ 非持久性病毒 • 特征是传毒介体在病植株上获毒饲育后病毒依附于口针里,在接种饲育时随同排出的唾液进入寄主植物体内,因此介体饲毒短时间后即可传毒,饲育期延长会降低传毒效率,病毒在介体体内没有循回期,传毒时间也很短。
(2) 持久性病毒: 饲毒时间较长,介体饲毒后病毒随唾液吸入到肠道,渗透过肠壁进入血淋巴,最后循回到口器的唾液腺里,取食时随唾液进入植物体内。因此必须经过一定时期的循回期才能传毒,有的病毒在虫体内能增殖,一次获毒后可终生传毒,有的还可经卵传毒给下一代。
(3) 半持久性病毒: 介体获毒饲育期和传毒时间均较长,病毒在介体体内没有循回期,也不能在虫体内增殖。蜕皮后不再保持传毒能力。
病毒与介体之间存在专化性。 • 蚜虫传播的病毒常引起花叶型、环斑型及黄化型和卷叶型症状,大都属于非持久性病毒,这类病毒都很容易汁液摩擦传播。 • 叶蝉传播的病毒大都属于持久性病毒。
2.土壤中的介体 ⑴ 真菌 已发现7种真菌传播19种病毒, 油壶菌属、粘菌属系植物的非致病菌,为主要的真菌介体; 集壶菌、粉痂菌及腐霉菌除为植物本身病原菌外,还能传播多种病毒。 病毒与真菌介体的关系除少数芸苔油壶菌为游动孢子体外带毒外,大多数为孢子内带毒,属持久性传毒。
⑵ 线虫 已知有5个属的线虫介体传播约23种病毒。一般线虫蜕皮后就不能传毒,饲毒和传毒时间只要15分钟至1小时。线虫传播的植物病毒均属于非持久性,线虫传病毒也可借花粉、种子传,极易汁液传,许多线虫传病毒引致环斑型症状。
3.螨类介体 主要是叶芽螨和蛛螨。 螨和病毒的关系研究较多的是由曲叶螨(Aceria tulipae)传播的小麦条点花叶病毒,这是属于循回型,病毒主要存在于中肠,没有发现在体内增殖的现象。 螨类只有在若虫期获毒以后才有传毒能力,带毒螨蜕皮后仍能传毒,但不能经卵传,汁液摩擦亦可传,螨类传播病毒的效率有时是很高的,如单个带条点花叶病毒的螨就能使小麦发病。