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Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S , Wirth MP

Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen. Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S , Wirth MP. Einleitung. Die humane Telomerase Reverse Transkriptase (hTERT). Bedeutend bei der Tumorgenese, verlängert Telomere Immortalisierung einer Zelle

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Presentation Transcript

  1. Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Einleitung Die humane Telomerase Reverse Transkriptase (hTERT) • Bedeutend bei der Tumorgenese, verlängert Telomere • Immortalisierung einer Zelle • Fehlregulation (Induktion) von hTERT in Tumoren microRNAs • endogene, nichtkodierende Transkripte, evolutionär konserviert • Funktion: Regulation der Genexpression und damit Beeinflussung von Proliferation, Differenzierung, Zelltod, Tumorgenese, etc. • OncomiRs: miRNAs, die zur Fehlregulation von Genen im Tumor beitragen 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

  2. Inhibitoren • Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Fragestellung Spielen miRNAs bei der Fehlregulation von hTERT im BCa eine Rolle? Hypothese & Vorgehensweise miR-26a miR-147 miR-195 miR-26a miR-147 miR-195 Precursor hTERT-Protein hTERT-Protein nichtmaligne Zelle BCa-Zelle 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

  3. Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Ergebnisse 1.) Expression von hTERT in BCa-Zelllinien 2.) Expression von miR-26a, miR-147 & miR-195 in BCa-Zelllinien  Auswahl von miR-195  Modellzelllinien EJ28, J82 und Fibroblasten 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

  4. Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Ergebnisse – Expressionsmodulation von miR-195 (1) 1.) Optimierung der Transfektionsbedingungen für Inhibitoren/Precursor  NeoFX, 48h reverse Tf, 50nM 2.) Behandlung von EJ28-Zellen mittels Inhibitor/Precursor-Konstrukten  effektive miR-195-Induktion und –Hemmung möglich 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

  5. unbehan-delt miR-195-Prec. miR-Prec. Kontr. miR-Prec. Kontr. miR-195-Inhib. miR-Inhib. Kontr. unbehan-delt miR-195-Prec. miR-195-Inhib. miR-Inhib. Kontr. hTERT ß-Actin • Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Ergebnisse – Expressionsmodulation von miR-195 (2) Einfluss auf die hTERT-Expression? J82 FB EJ28  hTERT-Induktion/-Inhibition nur auf Proteinebene 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

  6. Telomeraseregulation durch microRNAs in Harnblasenkarzinomzellen Koi L, Kraemer K, Kunze D, Herrmann J, Hakenberg OW, Füssel S, Wirth MP Ausblick • hTERT-Induktion in Fibroblasten detailliert analysieren • Wirkt sich eine miR-195-vermittelte hTERT-Modulation auf die Chemosensitivität der Zellen aus? • Transkript-Microarrays: miR-195-Precursor vs. Kontrollbehandlung • miR-195-Inhibitor vs. Kontrollbehandlung •  Identifizierung von beteiligten Faktoren auf Transkriptebene hTERT miR-195 X2 ??? X1 ??? 18. Symposium Experimentelle Urologie, Marburg, 10.-12.04.08

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