Microbiologie

1. Microbiologie L’Étude des Microorganismes

2. Définition d’un Microorganisme • Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» • Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) • Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

3. Microorganismes en Laboratoire Les Milieux de Croissance

4. Buts • Croissance sous des conditions contrôlées • Maintien • Isolation de cultures pures • Tests métaboliques

5. Types • Liquides (bouillons) • Permets la culture en suspension • Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres • Permets la croissance de grands volumes • Milieux Solides • Mêmes que milieux liquides + agent de solidification • L’agar : Polysaccharide dérivé d’une algue

6. Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Turbide Limpide + sédiment La Croissance en Bouillon

7. Colonie simple Croissance sur Gélose • Croissance sur surface solide • Croissance isolée • Permets l’isolation de colonies simples • Permets l’isolation de cultures pures

8. Milieux Solides (suite) • Pente • Croissance en surface et en profondeur • Différentes disponibilités d’oxygène • Entreposage à long terme • Tube profond • Milieu semi-solide • Entreposage à long terme • Faible disponibilité d’oxygène

9. La Microscopie Les Colorations

10. Colorations Simples • Coloration positive • Coloration du spécimen • Coloration indépendante de l’espèce • Colorations négatives • Coloration de l’environnement de fond • Coloration indépendante de l’espèce

11. Méthodes • Coloration simple: • Un seul agent de coloration • Permet de déterminer la taille, la forme, et l’arrangement des cellules

12. Les Formes Cellulaires • Coccus: • Sphères • Division sur 1,2 ou 3 plans • Nombre de plans de division donne différents arrangements • Arrangements typiques de différents genres bactériens

13. Diplococcus Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus Les Cocci (Coccus) Plans de division Arrangements Indice: si le nom du genre de bactéria finisse par coccus, la forme de la bactérie est cocci

14. Les Formes Cellulaires (suite) • Bacilles: • Bâtonnets • Division sur 1 plan seulement • Arrangements typiques de différents genres bactériens

15. Les Bacilles Plans de division Arrangements Diplobacille Streptobacille Indice: si le nom du genre de bactérie finisse par bacille, la forme de la bactérie est bacille Si elle ne finisse pas par cocci, c’est probablement une bacille.

16. Quantifier les Microorganismes • Mesure de turbidité: densité optique • Comptes viables • Nombre le plus probable • Comptes directs

17. Mesure de la Turbidité  • Mesure la quantité de lumière qui peut traverser un échantillon • Le moins de lumière qui traverse l’échantillon le plus dense est la population • Mesure la densité optique ou le pourcentage de transmission

18. Lumière Détecteur….lecture 600nm Mesure de la Turbidité • Spectrophotomètre (A600): • Mesure de la Densité Optique Lecture différente

19. % Transmission D.O. 600nm 0 2.0 1.0 50 0 100 Densité cellulaire Relation inverse

20. Comptes Viables  • Dilutions en séries de l’échantillon • Étalement des dilutions sur milieu approprié • Chaque colonie simple est originaire d’une unité formatrice de colonie (UFC) • Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon

21. 63 UFC/0.1 ml de 10-5630 UFC/1.0 ml de 10-5630 UFC/ml X 105 = 6.3 x107/ml dans l’échantillon original Si il y avait 100 ml d’échantillon bactérien?

22. Avantages: Dénombre les microorganismes viables Peu distinguer différents microorganismes Limites: Pas de milieu universel Ne peut pas demander combien de bactérie dans un lac Peut demander combien d’E. coli dans dans un lac Nécessite la croissance du microorganisme UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli ? ? = =