1 / 25

Kampylobaktery v potravním řetězci

Kampylobaktery v potravním řetězci. Iva Steinhauserová Gabriela Bořilová. Veterinární a farmaceutická univerzita Ústav hygieny a technologie masa Palackého 1-3 Brno, 612 42. KAMPYLOBAKTERIÓZA. epidemiologicky významné alimentární onemocnění – zoonóza

zeno
Download Presentation

Kampylobaktery v potravním řetězci

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Kampylobaktery v potravním řetězci Iva Steinhauserová Gabriela Bořilová Veterinární a farmaceutická univerzita Ústav hygieny a technologie masa Palackého 1-3 Brno, 612 42

  2. KAMPYLOBAKTERIÓZA • epidemiologicky významné alimentární onemocnění – zoonóza • původce: termofilní druhy rodu Campylobacter – C. jejuni, C. coli • kampylobakteriózy x salmonelózy • rozvinuté země x rozvojové země Vzhled C. jejuni pod elektronovým mikroskopem

  3. KAMPYLOBAKTERIÓZY VE SVĚTĚ

  4. NÁRŮST KAMPYLOBAKTERIÓZ • zlepšení diagnostických metod • zkvalitnění zdravotnické dokumentace / administrativy • nárůst konzumace drůbeže/drůbežích výrobků Produkce = vysoká efektivita výkrmu, vysoce prošlechtěná masá plemena Ekonomika = relativně nízká cena Společnost = přijatelné pro většinu skupin obyvatel, semivegetariáni, náboženské důvody Výživa = nízký obsah tuku, snadná stravitelnost, rychlá a snadná kulinární úprava, vysoká míra inovace nabízeného sortimentu (např. drůbež s prodlouženou dobou výkrmu, baby výrobky, apod.)

  5. ZDROJENÁKAZY • kontaminované suroviny / potraviny = syrové maso, syrové mléko, syrová zelenina = nedostatečně tepelně upravené maso (chybná kulinární úprava), mražené výrobky • kontaminovaná voda = použití kontaminovaných povrchových nebo odpadních vod • kontakt se zvířaty = zemědělská prvovýroba, domácí mazlíčci (pets)

  6. VÝSKYTCAMPYLOBACTER SPP. • caecum a colon hospodářských a volně žijících zvířat (většinou bez klinických příznaků) • drůbež = vysoký výskyt = 0 – 92 % farem (0 – 100 % jedinců v hejnu) = C. jejuni, C. coli, C. fetus subsp. fetus, C. lari = různá prevalence u různých druhů drůbeže (brojleři, křepelky, krůty) = různá prevalence u stejných druhů drůbeže v různých zemích = vliv chovné technologie, věk zvířat, zoohygiena farem, logistika porážek

  7. VÝSKYTCAMPYLOBACTERSPP. • divocí ptáci = bažanti, vrabci, holubi, vrány,aj. • prasata = 30 – 70 % (C. coli) • hlodavci, hmyz • pets (častý a těsný kontakt s lidmi (dětmi) • skot = 10 – 30 % • ovce = 10 – 30 %

  8. KULTIVACE CAMPYLOBACTER SPP. • ČSN EN ISO 102 72(2006) Horizontální metoda průkazu a stanovení počtu Campylobacter spp. Pomnožení = bujon dle Boltona = při 37°C po dobu 4h = dále při 41,5°C po dobu 44h ±4h = mikroaerobně (GeneratingKit CAMPsystem) Izolace = mCCDA agar + druhá izolační půda (Karmali agar) = při 41,5°C po dobu 44h ±4h = mikroaerobně = charakteristické kolonie Vzhled Campylobacter spp. na Karmali

  9. IDENTIFIKACE PCR / RFLP • typizace termofilních Campylobacter – C. coli, C. jejuni, C. lari a C. upsaliensis = 491 bp: gen 23S rRNA = specifický pro termofilní Campylobacter spp. • štěpení produktu restrikční endonukleázou AluI: identifikace C. jejuni a C. coli • štěpení produktu RE Tsp509I = identifikace C. lari a C. upsaliensis)

  10. PCR IDENTIFIKACE C. JEJUNI /C. COLI • identifikace pomocí multiplex PCR • 16S rRNA gen – 857 bp = Campylobacter spp. • mapA gen – 589 bp = Campylobacter jejuni • ceuEgen– 462 bp = Campylobacter coli Identifikace C. jejuni / C.coli pomocí mPCR M 1 2 3 4 5 857 bp 589 bp 462 bp 1 2 M 3 4 jejuni coli mix coli jejuni (M = marker, 1 = C. jejuni ATCC 33560, 2= C. coli ATCC 43478, 3 = mix, 4 = C. coli wild typ, 5 = C. jejuni wild typ)

  11. REZISTENCE K ATB Agarová diluční metoda (CLSI M7 – A7) • ATB :NAL = kyselina nalidixová,CIP = ciprofloxacin, TET = tetracyklin, ERY= erythromycin, CMP = chloramphenicol, AMP = ampicilin, GEN = gentamicin + ENR = enrofloxacin, KAN = kanamycin, STR = streptomycin • inoculum:48 h kultura, ředěna v BHI do 0.5McF • kultivace:Mueller - Hinton agar • inkubace:42ºC po dobu 48±2h, mikroaerobně (GeneratingKit CAMPsystem) • vyhodnocení: CLSI M100 - S16 (2006) – Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, Sixteenth Informational Supplement COMITE DE L’ANTIBIOGRAMME DE LA SOCIETE FRANCAISE DE MICROBIOLOGIE - Recommandations 2007

  12. MECHANISMUS REZISTENCE • sledování pomocí molekulárně-biologických metod – PCR, mPCR, PCR/RFLP, MAMA PCR RFLP detekce mutace A2059G – štěpení RE BsaI • REZISTENCE K MAKROLIDŮM • PCR-RFLP + MAMA PCR • detekce dvou bodových mutací (A2074C + A2075G) v genu 23S rRNA • ERY 320 bp M 1 2 3 4 M = marker 1, 2 , 3 , 4 = resistant strains C. coli • REZISTENCE K TETRACYKLINŮM • MULTIPLEX – PCR • detekce tet genů • tet(O), tet(M) + tet(A), tet(B) tet(E) • TET • REZISTENCE K CHINOLONŮM • MAMA PCR • detekce mutací v genu gyrA • mutace na pozici Thr-86-Ile • NAL, CIP, ENR

  13. VÝSKYT CAMPYLOBACTER SPP. NA FARMÁCH BROJLERŮ V ČR

  14. VÝSKYT A TYPIZACE CAMPYLOBACTER SPP. IZOLOVANÝCH Z BROJLERŮ

  15. VÝSKYT CAMPYLOBACTER SPP. U DRŮBEŽE VE VYBRANÝCH ZEMÍCH

  16. VÝSKYT CAMPYLOBACTER SPP. NA FARMÁCH S RŮZNOU TECHNOLOGIÍ CHOVU BROJLERŮ V ITÁLII

  17. FLA– RFLP SUBTYPIZACE C. JEJUNI • amplifikace variabilní částgenu proflagellinA • profily fragmentů po štěpení třemi RE: AfaI – 6 typů,MboI – 7 typů HaeIII – 5 typů • kombinací typů štěpení dosud nalezeno31 subtypů C. jejuni

  18. PFGE SUBTYPIZACE C. JEJUNI • pulsní gelová elektroforéza celého chromozomu štěpeného RESmaI • fragmentyděleny na CHEF-DR III systému (BioRad), 1% agaróza, 200 V, úhel 120o, 9oC; 5 -10 s, 4 h; 10 - 40 s, 14 h; 50 - 60 s, 4 h. • dosud bylo nalezeno 32 PFGE subtypů b+b1, e+1+ e2 – příbuzné kmeny, * - C. coli

  19. VÝSLEDKY SUBTYPIZACE • chovy nejsou infikovány různými bakteriálními klony, kombinace výsledků obou analýz naznačují, že jednotlivá hejna byla kontaminována převážně identickými klony u kterých během kolonizace došlo k mutacím • variabilitu subtypů lze vysvětlit především mutacemi v genu flaA (detekované PCR/RFLP) polymorfismy v oblastech štěpených SmaI (detekované PFGE) jsou méně časté. • genotyp zjištěný PFGE se jeví jako stabilnější, mutace v genu flaA jsou častější a vytvářejí tak větší variabilitu PCR subtypů

  20. REZISTENCE - DRŮBEŽ Tab. : Monitoring rezistence/senzitivity k vybraným ATB u kmenů C. coli and C. jejuni izolovaných z brojlerů (2006)

  21. BAŽANT OBECNÝ (Phasianus colchicus subsp. torquatus) Tab. : Monitoring výskytu termofilních Campylobacter spp. u bažanta obecného (2006)

  22. KŘEPELKA JAPONSKÁ(Coturnix coturnix japonica) • vyšetřeno 50 ks zdravých zvířat z intenzivního chovu (2006) • pozitivní nálezy – 86 % (obsah caeca) • 70 % (36 %) -C. jejuni • 34 % -C. jejuni + C. coli • potencionální nebezpečí pro konzumenta (specifická skupina) – ostatní druhy chovaných ptáků (pernatá zvěř)

  23. PRASE DOMÁCÍ(Sus scrofa f. domestica) Tab. : Monitoring výskytu termofilních Campylobacter spp. u jatečních prasat (2006) • vzorky odebírány z vnitřní části recta před vykolením • nízké nálezy na mase u prasat • 35 % vyšetřených kmenů C. coli - multirezistentní Monitoring ATB rezistence u izolovaných kmenů C. coli

  24. HUMÁNNÍ KMENY CAMPYLOBACTER SPP. • získány jako klinické izoláty (n = 213) • typizace mPCR, PCR/RFLP x biochemické testy • C. jejuni – 80 % C. coli - 10 % C. jejuni + C. coli – 10 % • subtypizace C. jejuni – vysoká variabilita genotypů Monitoring rezistence/senzitivity k vybraným ATB u kmenů C. coli and C. jejuni izolovaných z humánních pacientů

  25. DĚKUJI VÁM ZA POZORNOST

More Related