Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции

1. Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции Зав. КДЛ: Т.Н. Емельянова Ульяновск 2014

2. Исследования применяемые для диагностики ВИЧ-инфекции

3. Иммуноферментный анализ Использование тест-систем 4 поколения позволяет одновременно определять как антитела к ВИЧ 1-го и 2-го типа, так и антигены (р 24). 1 этап – скрининговый 2 этап – референтный 3 этап – экспертный

4. Алгоритм исследования – + ИФА на ВИЧ Повторное исследование в дубле – + СТОП хотя бы один результат Подтверждающий тест (ИФА, Блот, ПЦР) – ± + Исследование в динамике(ПЦР,ИФА) Медицинское наблюдение и/или терапии

5. Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. • Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует! В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого возбудителя. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM. • Именно этотпринцип иммунной реакции(уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

6. Иммунный блоттинг

7. Интерпретация результатов ИБ

8. Антиген р 24 Заявленная чувствительность тест-систем 0,5 пг/мл • Антиген р24 может быть выявлен в крови методом иммуноферментного анализа уже через 1-2 недели после заражения и определяться до 8-й недели, затем его содержание резко снижается. • Далее в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р 24. Он приходится на период формирования СПИД.

9. Полимеразная цепная реакция - ДНК Обнаружение ДНК провируса ВИЧ в мононуклеарных клетках периферической крови. Используется как диагностическая методика для прямой диагностики ВИЧ-инфекции в следующих случаях: • При обследовании детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей. Использование ПЦР в этом случае позволяет сократить сроки постановки диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев. • В случае сомнительного результата ИБ. • В период серологического "окна".

10. Обнаружение РНК ВИЧ -«вирусная нагрузка». • Используется для количественного измерения концентрации вируса в крови с целью прогноза и мониторинга уже установленной ВИЧ-инфекции. • Вирусная нагрузка отражает интенсивность репликативного процесса в инфицированных клетках. • ВН при первичной инфекции высокая и находится в интервале 104-106, но с началом сероконверсии содержание РНК в плазме крови начинает резко снижаться вплоть до уровня, не выявляемого обычными методами

11. Иммунный статус Подсчёт CD4+ лимфоцитов является критическим параметром в мониторинге ВИЧ-инфекции и позволяет: • Оценивать состояние иммунной системы. • Наряду с клинической информацией определять момент начала антиретровирусной терапии. • Определять сроки для профилактики оппортунистических инфекций . • Оценивать эффективность лечения.

12. Экспресс диагностика ВИЧ

13. проточный Цитофлюориметр «Citomics FC500» ПЦМ позволяет проводить иммунофенотипирование любых клеток, к поверхностным или внутренним антигенам которых получены моноклональные антитела

14. Амплификатор в режиме реального времени “Abbott m2000rt”

15. Станции пробоподготовки позволяют автоматически подготовить пробы к измерению и свести ручной труд к минимуму.

16. Скорость, достоверность, воспроизводимость, точность, информативность и объективность полученных ПЦМ цитологических характеристик настолько высоки, что существующие сегодня другие методы оценки иммуногенетических и фенотипических свойств клеток не могут серьезно конкурировать с этой технологией.

17. Факторы, влияющие на результаты диагностики • выбор соответствующего метода лабораторного исследования; • правильная подготовка пациента к исследованию; • правильный забор крови; • правильная предварительная подготовка крови и своевременное проведение исследований; • правильное хранение и доставка материала в лабораторию; • материально-техническое обеспечение лабораторного исследования; • уровень квалификации медицинского персонала, проводящего исследование.

18. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ Сыворотка крови. • Завершённое формирование фибринового сгустка (фибрин – источник ложноположительных результатов) • Исключение возможности контаминации одного образца другим (использование индивидуальных палочек или наконечников для обведения сгустка, использование закрывающихся пробирок при транспортировке). • Сыворотки должны быть прозрачными, без признаков хилёза, гемолиза, «проростов», клеточной взвеси. Плазма. • Должна быть свободна от тромбоцитов. • Сроки хранения: На ИС 48 часов при комнатной температуре в темном месте. • На ИФА : сыворотка хранится в холодильнике не более 7 суток. • На ВН : если плазма не исследуется сразу, то должна быть заморожена при t – 20 град.

19. Для повышения уровня качества исследований, проводимых в лаборатории необходимо: • Регулярно участвовать в системах внешней оценки качества; • для оценки правильности проводимых исследований применять стандартные контрольные материалы; • для оценки воспроизводимости исследований проводить внутрилабораторный контроль качества каждой постановки ИФА, с последующим построением контрольной карты и анализом полученных результатов; • постоянное повышать квалификацию персонала; • строго соблюдать инструкции к тест-системам

20. Благодарюза внимание!