1 / 16

Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri podozrení na nákazu MVP

Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri podozrení na nákazu MVP Vypracovala: Ing. Andrea Brtková , PhD. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín. Pôvodca MVP: Paenibacillus larvae - grampozitívna fakultatívne anaeróbna sporulujúca baktéria v tvare tyčinky

liseli
Download Presentation

Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri podozrení na nákazu MVP

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri podozrení na nákazu MVP Vypracovala: Ing. Andrea Brtková, PhD.

  2. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • Pôvodca MVP: Paenibacilluslarvae • - grampozitívna fakultatívne anaeróbna sporulujúca baktéria v tvare tyčinky • - tvorí spóry – veľmi rezistentné voči vysokej teplote (deštrukcia v mede po 8,6 min., pri 121°C; vo vosku po 30 min., pri 121°C) • nedisponujú enzýmom kataláza štiepi H2O2 (opak iný Bacillusspp.) • rod Paenibacillus biochemicky aktívny (štiepi široké spektrum anorg. substrátov) • produkcia pyrazínov (charakteristická vôňa na kultivačných médiách) • produkcia enolázy – štiepi proteíny – virulenčný faktor • vysoká genotypová variabilita dokázaná fingerprintingom Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu

  3. Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • Klinická prehliadka - hodnotí: • - sila včelstva a jeho prejavy • - intenzita a kvalita plodovania, rovnomernosť zakladania • - celková úroveň a hygiena chovu • Odber vzoriek k laboratórnemu vyšetreniu: • - včelí plást s plodom alebo zásobami • - med • - melivo, vosk • ďalší materiál (peľ, materská kašička, • propolis, dospelé včely)

  4. Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • Vzorky je nutné dobre zabaliť (papierový sáčok, papierový obal ...) s presným označením mena a adresy + dôkladne vyplnená žiadanka veter.lekárom resp. povereným asistentom • Laboratórne metódy: • Mikroskopické: natívne preparáty (fázová mikroskopia), farbené preparáty (Gramovo farbenie, Schaefer Fulton acidorezistentné farbenie) • B) Kultivačné metódy:krvný agar, MYPGP agar, MYPPN agar; • inkubácia: aeróbne, pri 34-37ºC po dobu 4-5 dní • C) Detekcia pôvodcu MVP na úrovni molekulárnej biológie

  5. Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • Kultivácia pôvodcu MVP z meliva: • extrakcia: 1,5 g meliva + extrakčné činidlo = 1h trepať • pridať extrahovanú zmes k dH2O v pomere 1:3 • 5 minút povariť pri teplote 88-91ºC (aktivácia spór, deaktiváciasprievod.MIO) • pretrepať vyočkovať 5 x 0,2 ml na kultivačné média • kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby) • Kultivácia pôvodcu MVP z plástov: • prizaviečkovanom plode uvoľnímepomocousterilnéhoskalpelaviečkobunky • k zaschnutým larvám a príškvarom - kvapkasterilnejdH2O • obsah 5 – 10 podozrivýchbuniek – naočkovať na 5 PM s Krvnýmagarom • kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby) • Kultivácia pôvodcu MVP z medu a peľu: • zriediť med so sterilnúdH2O v pomere 1:1, v prípadepeľu v pomere 1:10 • 5 minút povariť pri teplote 88-91ºC (aktivácia spór, deaktiváciasprievod.MIO) • pretrepať vyočkovať 5 x 0,2 ml na kultivačné média • - kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby)

  6. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • 2010, 2011, 2012: Národný eradikačný program moru včelieho plodu (MVP) • trvanie NP: jeden rok, v prípade nepriaznivej epizootologickej situácie pokračovanie aj v ďalšom roku • vyšetrenie zmesných vzoriek zimného meliva: u všetkých chovateľov matiek; kočujúcich včelstiev • + melivo klinická prehliadka + klinické zmeny vyšetrenie plod. plástu • + plodový plást laboratórne potvrdenie MVP opatrenia na zabránenie šírenia MVP

  7. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • Slovensko - melivá: r.2010: celkom: 3922 / (+) 93 = 2% • r.2011: celkom: 4921 / (+) 196 = 4% • ‹50 KTJ/1g meliva; ›50-150; ›150-250; ›250-500; ›500 • r.2011 89 58 21 13 15 • Slovensko - plásty: r.2010: celkom: 379 / (+) 260 = 69% • r.2011: celkom: 715 / (+) 527 = 73% • - nesúlad: (+) melivo – nevyšetrený plást • nevyšetrené melivo – vyšetrený plást

  8. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • Západné Slovensko: r.2010: celkom: 731 / (+) 17 = 2,3% • r.2011: celkom: 983 / (+) 49 = 5,0% • pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) • TN – 11% nárast; SC – 6,5% (výnimka TT pokles o 10%) • Plásty: r.2011: celkom: 148 / (+) 125 = 84% • r.2010: celkom : 77 / (+) 58 = 75%

  9. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • Južné Slovensko: r.2010: celkom: 1120 / (+) 30 = 2,7% • r.2011: celkom: 1626 / (+) 65 = 4,0% • pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) • RS – 11% nárast; NZ – 9,7% (naopak pokles: DS - 3%; GA – 4,5%) • Plásty: r.2011: celkom: 150 / (+) 127 = 85% • r.2010: celkom : 68 / (+) 18 = 26%

  10. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • Severné Slovensko: r.2010: celkom: 956 / (+) 17 = 1,78% • r.2011: celkom: 1440 / (+) 40 = 6,25% • pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) • ZA – 8,5% nárast; DK – 3,5% (naopak pokles: MT 11%) • Plásty: r.2011: celkom: 349 / (+) 213 = 61% • r.2010: celkom : 150 / (+) 108 = 72%

  11. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL • Východné Slovensko: r.2010: celkom: 1115 / (+) 29 = 2,60% • r.2011: celkom: 896 / (+) 42 = 4,69% • pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) • RO – 52% nárast; PE – 43% (naopak pokles: MI 20%) • Plásty: r.2011: celkom: 68 / (+) 62 = 91% • r.2010: celkom : 84 / (+) 76 = 90%

  12. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL

  13. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • Cieľ programu: zistiť zdravotnú situáciu včelstiev u  • registrovaných chovateľoch včiel na celom území SR •  na základe zistených výsledkov vypracovať stratégiu na • zabránenie znižovania počtu včelstiev • v rámci programu sa budú sledovať: AFB, EFB, varoáza, akarióza, AetinaTumida, Tropilaelapsclarae(SK free), nozematóza, vírus chronickej paralýzy včiel, vírus akútnej paralýzy včiel a vírus deformovaných krídel • ozdravením chovov sa zlepší zdravotný stav, znížia sa straty na produkcii medu a ďalších včelích produktov, zabezpečí sa optimálne opelenie poľnohospodár. kultúr a ostatných rastlín • klinické prehliadky, odber meliva a vzoriek, laboratórna diagnostika úradných vzoriek a ostatné náklady potrebné na realizáciu programu = hradené zo štátneho rozpočtu SR Programdohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR

  14. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín • štruktúra programu: 3. klinické prehliadky – úradní veterinárni lekári + školení asistenti • I. prehliadka: zhromaždenie údajov - pracovné postupy včelárov, životného prostredí, v ktorom sú včelíny umiestnené, životaschopnosť a zdravotný stav včelstva • II. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, pri príznakoch ochorenia – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie. Včelár bude upozornený na potrebu samokontroly a povinnosti hlásenia úhynu alebo abnormálneho správania včiel • III. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, životaschopnosti a zdravotného stavu včelstiev – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie Programdohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR

  15. NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín Programdohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR

  16. Ďakujem za pozornosť

More Related