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Constitution d’un virus

Constitution d’un virus. Structures génétique des virus. Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN-. Structure :. Trans. Expression. Cis. Encapsidation: PSI: . Réplication. Génes structuraux. Transgène. Virus défectif. Virus défectif. Virus réplicatif. Pas de production

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Presentation Transcript


  1. Constitution d’un virus

  2. Structures génétique des virus Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN- Structure : Trans Expression Cis Encapsidation: PSI:  Réplication

  3. Génes structuraux Transgène

  4. Virus défectif Virus défectif Virus réplicatif Pas de production de nouvelles particules

  5. Les vecteurs dérivés des rétrovirus

  6. Famille des rétrovirus Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genres Moloney Murine Leukemia virus Rous Sarcoma virus Lentiviridae (rétrovirus complexe) Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H) Spumaviridae Virus Foamy

  7. Les oncorétrovirus rétrovirus simple

  8. Intégration Transcription Protéines virales Intégration Transcription inverse Recrutement dans la particule virale Initiation de la transcription inverse Structure du génome viral

  9. Transcription inverse Le cycle de réplication

  10. Le cycle de réplication

  11. Intégrase N-terminal C-terminal Domaine catalytique

  12. L’intégration (2)

  13.   Le cycle de réplication

  14. Etapes communes aux rétrovirus Entrée Transcription inverse/ intégration Mobilisation d’une information génétique dans une particule

  15. Définitions Transgène Séquences virales Les séquences cis sont les séquences associées au transgène Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre système d’expression

  16. Séquences cis : « initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Elaboration d’un vecteur Séquences cis : « initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Séquences indispensables Production de particules recombinantes Transfert de l’information génétique

  17. SA Les vecteurs Séquences cis

  18. Transcription SA SA Dans la cellule productrice AAAA 5’m7G ARN mobilisable dans une particule rétrovirale

  19. SA SA Dans les cellules cibles AAAAA 5’m7G Transcription inverse Intégration Provirus intégré dans la cellule cible

  20. Les systèmes de transcomplémentation Les séquences trans: protéines structurales enzymes (RT, IN, PR) Structurer la particule virale Cycle de réplication

  21. Transfection AA AA AA AA SA Production transitoire Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles

  22. Pseudotypage Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible  déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental  modification du tropisme du vecteur  enveloppes plus résistantes aux techniques de purification Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV-G)

  23. Rétrovirus et cycle cellulaire Interphase Prophase Métaphase Télophase Rétrovirus HIV FIV SIV ASV MoMLV peu trés Dépendance au cycle cellulaire

  24. Les vecteurs lentiviraux Famille : Retroviridæ Genre : Lentivirus Sous-espèces: -HIV 1 -HIV 2 -SIV -FIV -BIV -VISNA -CAEV -EIAV

  25. ppT central Spécificité du cycle des lentivirus MoMLV V.I.H

  26. Sites d’intégration des lentivirus

  27. Transactivation

  28. P P ARN mobilisé P Vecteur intégré dans les cellules transduites Les vecteurs SIN

  29. Les rétrovirus Mammalian C-type Lentivirus Avian C-type BLV/ HTLV Spumavirus D-type B-type Premiers vecteurs

  30. SA Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID): déficit: chaîne  du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15 déficit immuntaire majeur traitement: greffe de moelle allogénique Vecteur rétroviral: Chaîne  C ILR

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