170 likes | 288 Views
PCR Polymerase Chain Reaction. Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová. PCR (Polymerase Chain Reaction). Primery. krátké oligonukleotidy (18 – 30 nukleotidů) přímý primer x zpětný primer jsou komplementární k sekvencím na 3´konci odpovídajícího řetězce,
E N D
PCRPolymerase Chain Reaction Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová
Primery • krátké oligonukleotidy (18 – 30 nukleotidů) • přímý primer x zpětný primer • jsou komplementární k sekvencím na 3´konci odpovídajícího řetězce, ohraničujícím cílovou oblast DNA, kterou chceme amplifikovat
Anelační teplota • Tm = [4 x (G+C) + 2 x (A+T)] • Tanneal. = [4 x (G+C) + 2 x (A+T) -5] 5´ GAGACTCAAGAGAACCTA 3´ Tanneal. = ?
Počet kopií požadované oblasti DNA A = 2n n = počet cyklů
Modifikace PCR • nested PCR • multiplex PCR se sekvenčně specifickými primery
Analýza PCR produktu PCR s obecnými primery : • Hybridizace • Sekvenování • RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) • RT-PCR (kvantitativní PCR) RNA => cDNA