BIO-ALLERGY

1. BIO-ALLERGY ALERGIAS Las técnicas de ultima tecnología que su laboratorio estaba esperando ahora al alcance de todos.

2. ALERGIAS Enfermedad caracterizada por una hipersensibilidad a determinadas sustancias inocuas que, si se inhala, ingiere o se toca produce unos síntomas característicos. La sustancia a la que se es alérgico se denomina "alérgeno", y los síntomas provocados son definidos como "reacciones alérgicas".

3. Componentes principales que se requieren para que la reacción alérgica se desencadene: • ·ALERGENO: Sustancia causante de la alergia, es usualmente una proteína o una glicoproteína; puede ser inhalado, como el polvo o el polen; ingerido, como las proteínas de la clara del huevo o el marisco; inyectado, como la penicilina, o actuar por mero contacto, como la lana, el esparadrapo o los metales pesados. • INMUNOGLOBULINA E (IgE): Anticuerpo producido por el sistema inmunológico en respuesta al alergeno • MASTOCITOS: Células especiales que se encuentran en la piel y en órganos húmedos del cuerpo (nariz, ojos, boca), cargadas de gránulos de histamina • HISTAMINA: Sustancia que se libera en el proceso alérgico y que es la responsable de los síntomas de la alergia

4. METODOS EMPLEADOS ACTUALMENTE PARA EL DIAGNOSTICO DE LAS ALERGIAS • Pruebas cutáneas • Prueba de escarificación (scratch- test) • Prueba de parche (patch test) • Prueba de puntura (prick test) • PRUEBAS SERICAS • Cuantificación De Inmunoglobulina “E” Total • Cuantificacion De Inmunoglobulina “E” Específica

5. BIO-ALLERGY Técnicas Alergias

6. PRICK-TEST CUANTITATIVO • FUNDAMENTO PRICK-TEST.doc • Sistema integrado que permite  la realización de prick test y su procesamiento automático. • Se coloca al antebrazo el dispositivo de aplicación por medio de tiras autoadhesivas.  Por los orificios pequeños de su capa guía superior, se coloca en la piel  la gota de alergeno. Y se espera a que haga reaccion. • El Film de Lectura se superpone al dispositivo de aplicación, que ha  permanecido en el antebrazo del paciente durante la espera.   Permite dibujar el contorno del habón sobre el film y transportarlo al espacio reservado en la hoja codificada que le corresponda según la batería de alergenos probada . Esta hoja es leída por el escáner y procesada por el programa Prick-Scan 2000 generando un completo informe del resultado.

7. PRICK-TEST CUANTITATIVO Aplicación Alergenos  Punción con Lanceta Secado Piel  Espera de Reacción Contorneado de Habones Traslado a Hoja Codificada Lectura Escáner Impresión Resultados

8. RIDA® AllergyScreen FUNDAMENTO RIDA.pdf La prueba se basa en el principio del análisis del immunoblot. Los alérgenos especiales están pegados a la superficie de las membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reacción. El suero del paciente se mide con una pipeta en el canal de la reacción y se incuba en la temperatura ambiente. Durante este tiempo, los anticuerpos-IgE alergeno-específicos reaccionan con los alérgenos y se unen a las membranas de nitrocelulosa Se agrega un anticuerpo Anti- IgE humano unido a biotina y se incuba en temperatura ambiente. Después, se agrega un estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina y se incuba en la temperatura ambiente. Se observa una reacción de color enzimática específica de la fosfatasa alcalina que da lugar a la formación de precipitados en las tiras de prueba.

9. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA • Los alergenos se fijan en membranas de nitrocelulosa • Se adiciona el suero del paciente • Incubar por 45 minutos en agitación y lavar 3 veces por 5 segundos cada vez • Adicionar anticuerpo anti-IgE marcado con Biotina (Detección) • Incubar 45 minutos en agitación y lavar 3 veces por 5 segundos cada vez • Adicionar Streptavidina • Incubar por 20 minutos y lavar 3 veces por 5 segundos cada vez • Adicionar sustrato (BCIP/NBT) • Incubar por 20 minutos en la oscuridad y lavar con agua abundante • Limpiar y dejar secar al aire • Leer y Evaluar Visualmente o con Equipo RIDA-X-SCREEN®

10. B B B NBT NBT RIDA® AllergyScreen

11. IMMULITE 2500 3gAllergy IgE • FUNDAMENTO immulite.pdf • IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgE Específica es un análisis enzimoinmunométrico quimioluminiscente en fase sólida, en dos pasos, • Se basa en cinéticas en fase líquida en formato de bola10,11 . • Representa un avance significativo sobre los métodos convencionales basados en la unión de los alérgenos a un soporte sólido, como los discos de papel. • Los alérgenos se unen covalentemente a una matriz polímero/copolímero soluble, la cual a su vez está marcada con un ligando. El uso de un copolímero aminoacídico aumenta la cantidad de alérgeno que puede soportar la matriz.

12. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA • Seleccionar una posición libre en el Carrusel de Reactivos a través del • software. • Colocar los Viales de Alérgenos que contienen alérgenos específicos, • paneles de alérgenos específicos, anticuerpo Ajustador IgE Específica, • y/o anticuerpo Control IgE Específica, en el Soporte de Viales de Alérgenos, • La muestra a utilizar es de 50ul de suero • Se pone en funcionamiento el equipo y se interpretan los resultados que se obtienen en pantalla

13. FA FA FA S IMMULITE 2500 3gAllergy IgE

14. Phadebas RAST • FUNDAMENTO • Prueba para el diagnostico in Vitro de alergias atópicas • Cuantifica la cantidad de IgE alergeno especifica circulante, en muestras de sangre • El alergeno de interés es unido por enlace covalente a un disco de papel, reacciona con la IgE especifica de la muestra problema • Se añaden Anti-IgE marcado con radioisótopos formando un complejo que se leerá con un contador gamma.

15. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA • Añadir discos de referencia al Test • Añadir suero de referencia en duplicado • Añadir muestra a estudiar • Incubar por 3 horas • Lavar con solución de lavado 3 veces • Añadir Anti-IgE marcada con radioisótopos • Incubar durante una noche • Lavar con solución de lavado 3 veces • Medir radioactividad

16. Phadebas RAST REACCION

17. Phadebas IgE PRIST • FUNDAMENTO • Mide la cantidad de IgE total circulante en muestras de sangre. • Análisis radio-inmunológico directo que emplea discos de papel con Anti IgE covalente pegado que va a reaccionar en la primera incubación con la IgE de la muestra problema. • Se añade Anti-IgE marcados con isótopos radioactivos y purificados dando a lugar un complejo • Se mide la radioactividad en un contador gamma

18. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA • Colocar discos de Anti-IgE por duplicado • Añadir solución estándar IgE para sensibilizar • Añadir muestra a estudiar • Incubar por hora y media • Añadir solución salina 3 veces para lavar • Añadir Anti-IgE marcada con radioisótopos • Incubar por dos horas y media • Lavar con solución salina 3 veces • Medir radioactividad

19. Phadebas IgE PRIST

20. DETERMINACIÓN DE IgE ALERGENO-ESPECÍFICA CLA CLA+IgE.pdf • prueba para determinación de IgE alergeno-específica se realiza en un pequeño dispositivo de plástico • El suero del paciente se pone en contacto simultáneamente con varios alergenos o mezclas de alergenos. La cámara contiene una serie de filamentos individuales de celulosa, cada uno tiene unido de forma covalente un alergeno o una mezcla de alergenos. • La prueba se efectúa llenando la cámara de prueba con el suero del paciente. La IgE del suero se une, durante la incubación, a los filamentos de celulosa recubiertos de alergeno., • Se agrega a un anticuerpo contra IgE marcado con enzima, el cual se unirá a la IgE sérica previamente unida a los filamentos de celulosa. • Se añade una mezcla fotorreactiva que reacciona con el anticuerpo marcado y produce quimioluminiscencia.

21. PROCEDIMEINTO DE LA PRUEBA • Coloque las cámaras de pruebas llenas de suero en el soporte para cámaras de prueba. • Aspire lentamente de forma que el suero del paciente se introduzca en la cámara de prueba hasta cubrir el filamento más alto. • Incube a temperatura ambiente durante 16 a 24 horas • Lave las cámaras de prueba 3 veces • Llene la cámara de prueba con el reactivo con anticuerpo • Incube a temperatura ambiente durante 4 horas ± 15 minutos • Lave las cámaras de prueba 3 veces • Llene las cámaras de prueba con la mezcla fotorreactiva • Incube las cámaras durante 10 minutos antes de leer los valores en el luminómetro. Deben leerse los resultados de todas las cámaras de prueba en un plazo máximo de 60 minutos tras la introducción del agente fotorreactivo.

22. E E E E E E E E E PRUEBA PARA DETERMINACIÓN DE IgE ALERGENO-ESPECÍFICA CLA

23. UNICAPSYSTEM FUNDAMENTOUNICAPSYSTEM.doc UniCAP IgE total es un análisis cuantitativo in vitro para la medida de IgE total en muestras humanas del suero o del plasma. Anti-IgE, covalente unida a ImmunoCAP, reacciona con el IgE total en el espécimen paciente. Se los anticuerpos contra IgE marcados con una enzima se agregan para formar un complejo. Se agrega una solución de desarrollo y una para parar la reacción. Después de parar la reacción, la fluorescencia se mide. La fluorescencia es directamente proporcional con la concentración de IgE en la muestra..

24. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA • Fase sólida con Antígenos en exceso • Agrega muestra del paciente • Incubar 30 min y lavar • Agregar anticuerpos marcados con una enzima • Incubar 15 min y lavar • Agregar solución de desarrollo(4MUP) y luego solución stop • Leer reacción

25. E E E 4MUP 4MUP UNICAPSYSTEM