1 / 21

Üsasisese infektsiooni diagnoosimine laboriarsti vaatenurgast .

Üsasisese infektsiooni diagnoosimine laboriarsti vaatenurgast . Elve Raukas. OÜ Quattromed, Tartu . Molekulaardiagnostika DNA ja RNA uuringud, geenide analüüs. Uuringumeetodid * PCR - polümeraasi ahelreaktsioon.( Polymerase Chain Reaction ).

airell
Download Presentation

Üsasisese infektsiooni diagnoosimine laboriarsti vaatenurgast .

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Üsasisese infektsiooni diagnoosimine laboriarsti vaatenurgast. Elve Raukas. OÜ Quattromed, Tartu.

  2. Molekulaardiagnostika DNA ja RNA uuringud, geenide analüüs. Uuringumeetodid * PCR- polümeraasi ahelreaktsioon.(Polymerase Chain Reaction). Reaktsioonil toimub nukleiinhapete amplifitseerimine. Meetodi võttis kasutusele 1985.a. Kari Mullis. *LCR- ligaasi ahelreaktsioon (Ligase Chain Reaction) *TMA- transkriptsioon-medieeritud amplifikatsioon (Transcription-mediated amplification) *PCR meetodi võimalused * suur tundlikkus ja spetsiifilisus; kiirus * saab määrata mitmeid patogeene ühest proovist * genotüpeerimine, sekveneerimine * vähenõudlik transpordi ja säilitustingimuste suhtes © Elve Raukas

  3. Chlamydia trachomatise diagnoosimisel kasutatava PCR meetodi tundlikkuse määramine 300 30 3 30 15 501 404 331 291 242 190 147 111 © Elve Raukas

  4. Üsasiseste viirusinfektsioonide detekteerimine PCR meetodiga.Van den Veyver IB, Mol Genet Metabol, 1998. Uuriti 303 viirusinfektsiooni kahtlusega ebanormaalset rasedust. Uuringumaterjalina kasutati: amnioni vedelik loote veri pleura vedelik loote koed platsenta PCR meetodil uuriti viirusi: CMV (cytomegalovirus) HSV (herpes simplex virus) Parvoviirus B19 adenoviirus enteroviirus EBV ( Epstein-Barr viirus) RSV (respiratory synsytial virus) © Elve Raukas

  5. II. Üsasiseste viirusinfektsioonide detekteerimine PCR meetodil.Van den Veyver IB, Mol Genet Metabol, 1998 * Viirus leiti 124 patsiendil 303-st (41%). * PCR positiivsed olid 144 analüüsitud proovi 371-st (39%) Kõige enam leitud viirus oli adenoviirus - 74 patsienti (24% patsientidest) (51 % kõigist positiivsetest) Teised leitud viirused olid : CMV ( 30 patsienti) enteroviirus ( 22 patsienti) HSV ( 9 patsienti) parvoviirus ( 8 patsienti) EBV ( 4 patsienti) RSV (2 patsienti) Mitu viirust leiti 13 patsiendil, 9 nendest surid üsa siseselt. Adenoviirus ja enteroviirus olid varem teadmata loote infektsioonide põhjustajad. © Elve Raukas

  6. Chlamydia trachomatis. *C.trachomatis onkõige enam levinud seksuaalsel teel ülekantav patogeen. Kuni 80% naistest asümptomaatilised. *Koekultuuri meetodi tundlikkus võrreldes PCR meetodiga on 85%. *Genitaalse C.trachomatise infektsiooni diagnoosimise meetodid. ( Stary A. , Fourth Meeting of The European Societi for Chlamydia Research, Helsinki, August,2000) Diagnostilistest meetoditest “kuldne standard” on nukleiinhapete amplifitseerimise meetodid PCR ja LCR. © Elve Raukas

  7. Chlamydia trachomatis ja enneaegne sünnitus.Andrews WW et al, Am J Obstet Gynecol,2000. Analüüs võeti 22 – 24 raseduse nädalal ja 28 raseduse nädalal. Uringugrupp - 190 enneaegse sünnitusega patsienti (<37 nädalat). Kontrollgrupp - 190 patsienti normaalse raseduse ajaga ( >/= 37 nädalat) C. trachomatisleiti 11 % patsientidel. Enneaegsed Kontrollgrupp 24 rasedusnädal 15,8% 6,3% 28 rasedusnädal 12,6% 10.9% 24 rasedusnädalal C.trachomatis positiivsete patsientidel oli enneaegseid sünnitusi <37 nädalat - 2 korda rohkem kui klamüüdia negatiivsetel < 35 nädalat - 3 korda rohkem kui klamüüdia negatiivsetel Bakteriaalset vaginoosi esines - C.trachomatis positiivsetel 57,1% , - C. trachomatis negatiivsetel 32,9%. © Elve Raukas

  8. Vanus .Chlamydia trachomatis ja bronhioliit Khan MA ,PotterCW; Journal of Infection, 1996.

  9. Asümptomaatiliste rasedate amnioni vedeliku mikrofloora rasedusekeskmisel perioodil. Reet Mändar, Krista Lõivukene, Aivar Ehrenberg, Imbi Smidt, Elve Raukas, Virve Kask, Marika Mikelsaar, Scand J Infect Dis , 2001. Amnioni vedelik oli võetud geneetilisteks uuringuteks. Mikroorganismide suhtes uuriti 22 amnioni vedelikku. Enamik amnioni vedelikke olid steriilsed. C.trachomatis leiti 2 juhul ( PCR meetodil) Propionibacterium spp. leiti 1 juhul. Corynebacterium 1 juhul.

  10. Genitaaltrakti koloniseerivad Mycoplasma liigidTaylor-Robinson,D et al. Lancet 1998;351(suppl III):12-15. • U.urealyticum -patogeen • M.genitalium - patogeen • M.hominis - võimalik patogeen • M.penetrans - võimalik patogeen • M.primatum - ei ole patogeen • M.spermatophilum - ei ole patogeen M.pneumoniae - patogeen M.fermentans - võimalik patogeen © Elve Raukas

  11. Genitaalsete mükoplasmade detekteerimine raseduse ajal PCR ja kultuuri meetodil.Luki N et al, Eur J Clin Microbiol Infedt Dis, 1998. Uuriti 47 kõrge riskiga naist ja 8 vastsündinut, kokku 55 patsienti. ( enneaegne lootevete puhkemine, enneaegne sünnitus, roosa amnioni vedelik) Ureaplasma spp. positiivsed - 31 patsienti Mycoplasma hominis positiivsed - 7 patsienti Mycoplasma genitalium positiivsed - 2 patsienti 4 PCR positiivset patsienti olid kultuuris negatiivsed. 1 kultuuris positiivne patsient oli PCR negatiivne © Elve Raukas

  12. Ureaplasma Ureaplasma parvum Ureaplasma urealyticum Kong,F. et al. J Clin Microbiol.March,2000. 80% Ureaplasma parvumserotüübid 1, 3, 6, 14. (varem U.urealyticum parvo grupp) 20% Ureaplasma urealyticumserotüübid 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 (varem U.urealyticum T960 grupp) © Elve Raukas

  13. Ureaplasma patogeensus raseduse ajal ja vastsündinutel. • Lootekestade põletik (chorioamnionitis). • Raseduse katkemine • Enneaegne lootevete puhkemine (preterm premature rupture of membranes) • Enneaegne sünnitus • Väga väike sünnikaal • Pneumoonia • Krooniline kopsuhaigus ( chronic lung disease) • ( bronchopulmonary dysplasia ) • ( persistent pulmonary hypertension) • Krooniline närvisüsteemi infektsioon © Elve Raukas

  14. I. Ureaplasma amnioni vedelikus enneaegse sünnituse korral.Martinez M, Scand J Infect Dis, 2001. • Grupp I - Enneaegne lootevete puhkemine. Raseduse aeg 24 – 34 nädalat. • Grupp II - Õigeaegne sünnitus. • Grupp III - Enneaegne sünnitus intaktse lootevee põiega. Kokku leiti 85 ureaplasma positiivset rasedat. ______________________________________________________________________ Liigid Grupp I Grupp II Grupp III Asümptom. rasedad ______________________________________________________________________ U.parvum 28 (75,7) 16 (80) 6 (100) 17 (77,3) U.urealyticum 8 (21,6) 4 (20) - 4 (18,2) Mõlemad liigid 1 (2,7) - - 1 (4,5) Kokku 37 (100) 20 (100) 6 (100) 22 (100) ______________________________________________________________________ ©Elve Raukas

  15. II. Ureaplasma amnioni vedelikus enneaegse sünnituse korral.Martinez M , Scand J Infect Dis ,2001 63 ureaplasma positiivset amnioni vedelikku. 50 nendest U.parvum 12 nendest U.urealyticum 1 nendest U.parvum + U.urealyticum U.parvum- ainus patogeen 36 juhul (72 %), koos teistega 14 juhul (28 %). U.urealyticum - ainus patogeen 9 juhul (75 %), koos teistega 3 juhul (25 %). Teised patogeenid koos U. p .( +U.u. ) : Peptostreptococcus ssp. – 4 ( + 1) juhul S.agalactiae – 3 +1 juhul Fusobacterium nucleatum – 3 juhul Prevotella ssp. – 3 juhul Mycoplasma hominis – 2 juhul Gardnerella vaginalis – 2 (+ 1) juhul Propionibacterium acnes - ( +1 juhul) Streptococcus viridans - (+1 juhul) Koagulaasnegatiivne stafülokokk - ( +1 juhul) © Elve Raukas

  16. III. Ureaplasma amnioni vedelikus enneaegse sünnituse korral.Martinez M, Scand J Infect Dis, 2001 Ureaplasma koos bakteriaalse vaginoosiga : U.parvum - Grupp I 8 (28-st) - 25% Grupp II 10 (16-st) - 63% Grupp III 5 (6-st) - 83,3% U.urealyticum – Grupp I 3 (8-st) - 38% Grupp II 1 (4-st) - 25% © Elve Raukas

  17. Ureaplasma seos raseduse katkemisega.Abele – Horn M, J Clin Microbiol, May,1997*Uuringugruppi võeti patsiendid, kellel ureaplasma oli ainus leitud patogeen. Ureaplasma positiivsete patsientide arv ( %) ___________________________________________________ Ureaplasma Grupp 1 Grupp 2 Grupp 3 liigid. Sünnitajad Raseduse katkemine PID Kokku 174 24 56254 __________________________________________________________________ U. parvum 156 (90 %) 18 (75 %) 32 ( 57%) 206(81%) U urealyticum 34 (20%) 10(42%) 32 (57%) 76(30%) Mõlemad liigid 8(5%) 2(8%) 4 (7%) 14 (6%) © Elve Raukas

  18. I. Ureaplasma detekteermine vastsündinute trahhea aspiraatides.Nelson S, J Clin Microbiol , 1998. Uuriti 103 väikese sünnikaaluga (<1,250 g) vastsündinut. ( 1- antitrüpsiin kroonilise kopsuhaiguse ärahoidmiseks enneaegsetel) Uuriti 225 trahhea aspiraati (endotracheal tube aspirate) * proovimaterjal võeti 0, 4 ja 14 päeval peale sündi Ureaplasma positiivsedPCR ja / või kultuuri meetodil: * 38 patsienti ( 77 trahhea aspiraati), 36% * 17 trahhea aspiraati ( 16 vastsündinult) olid vaid PCP-positiivsed 13 vastsündinut nendest olid kultuur- positiivsed mõnel teisel ajal. * 3 patsienti olid M. hominis positiivsed Tulemus Kultuur positiivne Kultuur negatiivne Analüüse kokku _____________________________________________________________________ PCR posit. 56 17 73 PCR negat. 4 148 152 Kokku 60 165 225 © Elve Raukas

  19. II. Ureaplasma detekteerimine vastsündinutel trahhea aspiraatidesNelson S, J Clin Microbiol, 1998 * Analüüsid PCR ja kultuuri meetodil 0, 4 ja 14 päeval peale sündi. 0 päev 4 päev 14 päev _____________________________ Kultuur posit. 12 26 21 PCR posit. 21 26 25 Kokku analüüsitud 102 65 58 * 45 patsienti, kelle proovid saadi kõigil kolmel päeval 0 päev 4 päev 14 päev ____________________________ Kultuur posit. 7 22 19 PCR posit. 16 22 24 © Elve Raukas

  20. Quattromedis PCR meetodil diagnoositavad seksuaalsel teel levivad patogeenid • Proovimaterjal võetakse ühe tampooniga • Tampooni transport kuivas katsutis • Analüüsitavad patogeenid: C. trachomatis - PCR N. gonorrhoeae - nested-PCR U. parvum, U. urealyticum - PCR M. genitalium - PCR M. hominis- PCR HSV (HSV1 ja HSV2) - nested-PCR HPV ( tüpeerimine) Üsasisene infektsioon : enteroviirused - nested PCR CMV - meetod välja töötamisel Trichomonas vaginalis - meetod välja töötamisel © Elve Raukas

More Related